前言
克林霉素磷酸酯属于抗生素类药物，人体吸收后可水解为克林霉素，发挥抗菌作用。本实验以克林霉素磷酸酯乳膏制成供试品溶液，参照ch.p2015版二部克林霉素磷酸酯有关物质项下方法进行测试。
表1.克林霉素磷酸酯样品信息
样品名称 | 英文名 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas编号 |
克林霉素磷酸酯 | clindamycin phosphate |
| c18h34cln2o8ps | 504.96 | 24729-96-2 |
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪，紫外检测器；
试剂材料
屈臣氏水；乙腈、甲醇为色谱纯； 浓氨水、磷酸均为分析纯；
磷酸缓冲溶液：取磷酸3.5 ml，加水1000 ml和浓氨水2.5 ml，并用浓氨水调节ph至3.9）；
克林霉素磷酸酯乳膏：由某制药公司提供；
高效液相色谱柱：venusil® c18 plus；5 µm，120 å；4.6 × 250 mm。
样品制备
克林霉素磷酸酯乳膏供试品溶液：精密称取样品1.8 g，加入10 ml正己烷，55℃水浴加热10 min，加入10 ml稀释剂(ph3.9磷酸缓冲溶液︰甲醇=2︰8) ，55℃水浴加热10 min直至溶解，振摇15 min后静置分层，取下清液离心10 min，过滤取续滤液即得供试品溶液；
克林霉素磷酸酯乳膏空白溶液：取空白辅料样品，同供试品溶液制备方法。
色谱条件
色谱柱：venusil® c18 plus；5 µm，120 å；4.6 × 250 mm；
流动相a：磷酸缓冲溶液︰90%乙腈甲醇=92︰8(v/v)；
流动相b：磷酸缓冲溶液︰90%乙腈甲醇=52︰48(v/v)；
流 速：1.2 ml/min；
波 长：210 nm；
柱 温：35℃；
进样量：25 µl；
梯 度：
表2.克林霉素磷酸酯梯度洗脱程序
时间/min | 流动相a/% | 流动相b/% |
0 | 95 | 5 |
40 | 5 | 95 |
41 | 95 | 5 |
50 | 95 | 5 |
结果与讨论
本实验参照中国药典2015年版 二部克林霉素磷酸酯有关物质项下检测方法，采用venusil® c18 plus色谱柱对克林霉素磷酸酯乳膏供试品溶液、空白溶液进行了测定，由表3及图可知，在上述色谱条件下，克林霉素磷酸酯与相对保留时间约为0.97的色谱峰分离度大于1.0，与相邻杂质分离度为1.45。
表3.克林霉素磷酸酯供试品溶液实验数据
化合物名称 | 相对保留 | 保留时间/min | 理论塔板数 | 分离度 | 拖尾因子 | 备注 |
未知杂质1 | 0.977 | 20.700 | 170841 | — | 0.69 | 图2、3 |
未知杂质2 | 0.984 | 20.854 | 135699 | 0.72 | 0.80 | |
克林霉素磷酸酯 | — | 21.195 | 123581 | 1.45 | 0.73 | |
未知杂质3 | 1.028 | 21.779 | 217180 | 2.73 | 1.03 |
图1.venusil® c18 plus色谱柱空白辅料供试品溶液高效液相色谱图
图2.venusil® c18 plus色谱柱克林霉素磷酸酯供试品溶液高效液相色谱图
图3.venusil® c18 plus色谱柱克林霉素磷酸酯供试品溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大图)
结论
本实验参照中国药典2015年版 二部克林霉素磷酸酯有关物质项下检测方法，采用venusil® c18 plus色谱柱对克林霉素磷酸酯乳膏供试品溶液、空白样品溶液进行了测定。结果表明在上述实验条件下，空白辅料对主成分无干扰，克林霉素磷酸酯峰可与相邻杂质峰实现分离。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil® c18 plus | 5 µm，120 å；4.6 × 250 mm | 1支 | vps952505-a |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫45°shore a；1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
微孔滤膜 | 单膜，13 mm，0.45 μm | 100个/包 | as021345-t |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：ap10226