氯霉素(chloramphenicol，chloromycetin)是由委内瑞拉链霉菌产生的抗生素。属广谱抑菌抗生素,是治疗伤寒,副伤寒的首选药,治疗厌氧菌感染的特效药物之一,其次用于敏感微生物所致的各种感染性疾病的治疗。用于治疗由伤寒杆菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、流感杆菌、布氏杆菌、肺炎球菌等引起的感染。由于氯霉素可引起严重的毒副作用，故临床仅用于敏感伤寒菌株引起的伤寒感染、流感杆菌感染、重症脆弱拟杆菌感染、脑脓肿、肺炎链球菌或脑膜炎球菌性脑膜炎，同时对青霉素过敏的患者，由于不良反应严重现用得越来越少。中国行业标准sn/t 1864-2007中规定其检测底限为0.1μg/kg。
(1) 样品提取
称取5.0g(精确到0.1g)粉碎好的样品，置于50ml离心管中，加入20ml 乙酸乙酯，在均质器中以14000rpm均质30s，以3000rpm离心5min，定量滤纸漏斗加约25g无水硫酸钠于浓缩瓶口，将离心过的上层乙酸乙酯提取液由滤纸漏斗过滤至浓缩瓶中，重复两次。合并滤液于50℃以下减压浓缩至近干，用4ml正己烷和4ml水依次将残渣转移至10ml玻璃离心管中，2000rpm涡旋混合1min，2000rpm离心3min，弃去上层正己烷溶液，再加入4ml正己烷，重复上述操作，下层水层做待净化液。
(2) 净化方法
先将cleanert c18 (500mg/3ml)小柱分别用5ml甲醇和5ml水平衡，然后将待净化液过柱(流速控制在2~3ml/min)，10ml水两次洗涤离心瓶，弃去滤液；再用5ml甲醇:水(2:8, v/v)溶液淋洗，弃去淋洗液，将小柱负压抽干；最后用6ml甲醇洗脱。收集洗脱液于40℃氮气吹近干，5ml水复溶，过0.22μm滤膜后待测。
(3) 检测方法
3.1 色谱条件
色谱柱：venusil mp c18，2.1×50mm，2.5μm，100å；
流动相：a相-水，b相-乙腈
柱 温：35℃；
进样量：5μl；
表1 液相色谱梯度洗脱条件：
时间(min) | 流速 (ml/min) | a/% | b/% |
0 | 0.25 | 85 | 15 |
1.5 | 0.25 | 85 | 15 |
5 | 0.25 | 30 | 70 |
5.01 | 0.25 | 10 | 90 |
6 | 0.25 | 10 | 90 |
6.01 | 0.25 | 85 | 15 |
8 | 0.25 | 85 | 15 |
3.2 质谱条件
离子源：电喷雾离子源 扫描方式：负离子扫描
电喷雾电压：-5500 v 雾化气压力：60 psi
气帘气压力：12 psi 辅助气压力：50 psi
离子源温度：600℃ 采集方式：多反应监测(mrm)q1、q3均为单位分辨率
质谱参数(见表2)
(4) 实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测氯霉素，加标量为1.0μg/kg、10μg/kg加标回收率在70%~120%之间，rsd值小于10%，能够满足检测要求。由图1和图2可看出经cleanert® c18固相萃取柱净化，采用venusil® mp c18色谱柱检测得到的氯霉素峰形良好，且保留时间稳定。
结论：
本实验建立了动物源性食品中氯霉素残留的lc-ms/ms检测方法，并结合固相萃取技术对氯霉素的残留量进行了测定。对于加标量为1 μg/kg、10 μg/kg的样品进行了检测，回收率在70%~120%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中的氯霉素残留。
(5) 订货信息：
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
venusil mp c18 | 2.5μm,100å,2.1×50mm | va920502-0 |
cleanert s c18 | 500mg/3ml,50/pk | s185003 |
保护柱套 | 适用于4.6×10mm和2.1×10mm | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 2.5μm,100å,2.1×10mm | va920102-0s |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写32×11.6mm,100/pk | 1109-0519 |
1.5ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫,45．shore a 1.0 mm,100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器(nylon) | 单膜,13mm,0.22μm,200/pk | as021320 |
一次性注射器 | 2ml两件式 无针头,100/pk | lzsq-2ml |
乙腈uv级 | 4l/瓶,色谱纯 | 015-4 |
正己烷hplc | 4l/瓶,色谱纯 | ah216-4 |
甲醇 | 4l/瓶,色谱纯 | s230-4 |
应用编号：af10026
