头孢噻呋(ceftiofur)又名赛得福，是第一个畜禽专用的第三代头孢类广谱抗生素，具有优良的抗菌活性和药动学特点，用于治疗牛、马和猪的呼吸系统疾病。随着头孢噻呋在畜牧业中的广泛使用，不可避免地引起其在动物组织或其产品中的残留。gb/t21314-2007规定了在畜禽肉中头孢噻呋方法检出限为50μg/kg。
(1) 样品提取
称取5.00g(精确到0.01g)均质好的样品，置于50.0ml离心管中，加入15.0ml 乙腈-水(15:2，v/v)，用均质器均质30s，洗涤均质器刀头，洗涤液倒回离心管中，在振荡器上振荡1min，4000rpm离心5min，合并上清液于50ml离心管中，再重复用10ml乙腈-水(15:2，v/v)洗涤刀头提取一次合并上清液，用乙腈-水(15:2，v/v)定容至40ml，准确移取20ml于100ml鸡心瓶中，35℃旋蒸去除乙腈。
(2) 净化方法
先将cleanert c18 (500mg/3ml)小柱分别用3.0ml甲醇、3.0ml水活化平衡；向除去乙腈层的瓶中加入25ml0.05mol/l磷酸盐缓冲溶液，涡旋混匀1min，用0.1mol/lnaoh溶液调节ph值为8.5，再以1ml/min流速过柱；然后用2ml磷酸盐缓冲液淋洗2次，再用2ml超纯水淋洗，最后3ml乙腈洗脱(流速1ml/min)，洗脱液于45℃氮气吹干。用1ml 0.01mol/l乙酸铵溶液(ph为4.5)溶解残留物，过0.22μm滤膜后待测。
(3) 检测方法
3.1 色谱条件
色谱柱：venusil asb c18，2.1×100mm，5μm，150å；
流动相：a相-10 mm乙酸铵溶液(ph为4.5)，b相-乙腈
柱 温：35℃；
进样量：5μl；
梯度洗脱：见表1
时间(min) | 流速 (ml/min) | a/% | b/% |
0 | 0.35 | 98 | 2 |
1.5 | 0.35 | 98 | 2 |
3 | 0.35 | 60 | 40 |
3.01 | 0.35 | 10 | 90 |
5 | 0.35 | 10 | 90 |
5.01 | 0.35 | 98 | 2 |
7 | 0.35 | 98 | 2 |
3.2 质谱条件
离子源：电喷雾离子源 扫描方式：正离子扫描
电喷雾电压：5500 v 雾化气压力：50 psi
气帘气压力：13 psi 辅助气压力：55 psi
离子源温度：550℃ 采集方式：多反应监测(mrm)
q1、q3均为单位分辨率
质谱参数(见表2)
(4) 实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测头孢噻呋，加标量为50.0μg/kg加标回收率大于75%，能够满足检测要求。由图1可看出经cleanert c18固相萃取柱净化，采用venusil asb c18色谱柱检测得到的头孢噻呋峰形良好，且保留时间稳定。
图1 头孢噻呋样品加标50.0μg/kg液相色谱/串联质谱质量色谱图：
结论：
本实验建立了头孢噻呋残留量检测的lc-ms/ms检测方法，并结合固相萃取技术对禽畜类肉中头孢噻呋的残留量进行了测定。对于加标量为50.0μg/kg的样品进行了检测，回收率大于75%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中的头孢噻呋残留量。
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
venusil asb c18 | 5μm,150å,2.1×100mm | vs951002-0 |
cleanert s c18 | 500mg/3ml,50/pk | s185003 |
保护柱套 | 适用于4.6×10mm和2.1×10mm | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 5μm,150å,2.1×10mm | vs950102-0s |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写32×11.6mm,100/pk | 1109-0519 |
1.5ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫,45．shore a 1.0 mm,100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器(nylon) | 13mm,0.22μm,200/pk | as021320 |
一次性注射器 | 2ml两件式 无针头,100/pk | lzsq-2ml |
乙腈uv级 | 4l/瓶,色谱纯 | 015-4 |
甲醇 | 4l/瓶,色谱纯 | s230-4 |
应用编号：af10030
