林可霉素(lincomycin，又称洁霉素)主要用链霉菌发酵得到。常作用于细菌核糖体的50s亚单位，通过抑制肽链的延长而抑制细菌蛋白质的合成，从而清除细菌表面a蛋白质和绒毛状外衣，使其易被吞噬和杀灭。林可霉素对机体免疫系统有增强免疫调节，使得多核型白细胞的吞噬和杀菌功能增强，改变细菌表面活性，抑制细菌毒素的产生。可用于治疗革兰氏阳性菌和支原体感染，对葡萄球菌、链球菌作用较强，对厌氧菌有抑制作用，在许多感染症的治疗中疗效显著。用作饲料添加剂时，可促进肉鸡和育肥猪的生长。林可霉素造成的动物源性食品安全问题备受人们关注，因此，欧盟和我国对动物源性食品中林可霉素限量做了严格规定，其最大残留量为1μg/kg。
(1) 样品提取
称取5.0g(精确到0.01g)均质好的样品，置于50ml离心管中，加入15ml乙腈，用均质器均质1min，在振荡器上振荡10min，4200rpm离心5min，取上清液于另一50ml离心管中；再加入10ml乙腈于样品残渣，重复提取一次，合并上清液于50ml离心管中，加入2.0g氯化钠和10ml正己烷，于振荡器剧烈振荡10min，以4200rpm离心10min，小心吸取中间乙腈层10ml于另一离心管中，55℃水浴氮气浓缩至近干。用7ml磷酸盐缓冲液分两次溶解残留物，作为待净化液。
(2) 净化方法
先将cleanert pep-2 (500mg/6ml)小柱分别用10ml甲醇，10ml水，5ml 0.2%氯化钠，5ml磷酸盐缓冲液活化平衡；然后将待净化液过柱(流速控制在1ml/min)；用10ml水和5ml甲醇-水(2:3，v/v)洗柱，弃去全部流出液，小柱用真空泵抽干15min；最后用10ml甲醇洗脱。收集洗脱液于45℃氮气吹干，用1ml 10mmol乙酸铵溶液(含0.15%甲酸)溶解残留物，过0.22μm滤膜后待测。
(3) 检测方法
3.1 色谱条件
色谱柱：venusil asb c18，2.1×100mm，5μm，150å；
流动相：a相-0.3%甲酸水溶液，b相-0.3%甲酸乙腈
柱 温：35℃；
进样量：10μl；
梯度洗脱：见表1
时间(min) | 流速 (ml/min) | a/% | b/% |
0 | 0.25 | 95 | 5 |
2 | 0.25 | 95 | 5 |
5 | 0.25 | 5 | 95 |
6 | 0.25 | 5 | 95 |
6.01 | 0.25 | 95 | 5 |
10 | 0.25 | 95 | 5 |
3.2 质谱条件
离子源：电喷雾离子源 扫描方式：正离子扫描
电喷雾电压：5500 v 雾化气压力：45 psi
气帘气压力：15 psi 辅助气压力：50 psi
离子源温度：550℃ 采集方式：多反应监测(mrm)
q1、q3均为单位分辨率
质谱参数(见表2)
(4) 实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测林可霉素加标回收率在84%~105%之间，rsd值小于10%，能够满足检测要求。由图1可看出经cleanert pep-2固相萃取柱净化，采用venusil asb c18色谱柱检测得到的林可霉素峰形良好，且保留时间稳定。
图1 林可霉素样品加标1.0μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图：
结论：
本实验建立了林可霉素残留量的lc-ms/ms检测方法，并结合固相萃取技术对猪肉中林可霉素的含量进行了测定。对于加标量为1.0μg/kg的样品进行了检测，回收率在84%~105%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中林可霉素的残留量。
(5) 订货信息：
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
venusil asb c18 | 5μm,150å,2.1×100mm | vs951002-0 |
cleanert pep-2 | 500mg/6ml,30/pk | pe5006-2 |
保护柱套 | 适用于4.6×10mm和2.1×10mm | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 5μm,150å,2.1×10mm | vs950102-0s |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写32×11.6mm,100/pk | 1109-0519 |
1.5ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫,45．shore a 1.0mm,100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器 | 13mm,0.22μm,200/pk | as021320 |
一次性注射器 | 2ml两件式 无针头,100/pk | lzsq-2ml |
乙腈uv级 | 4l/瓶,色谱纯 | 015-4 |
正己烷hplc | 4l/瓶,色谱纯 | ah216-4 |
甲醇 | 4l/瓶,色谱纯 | s230-4 |
应用编号：af10037
