泰乐菌素(tylosin)，亦称泰农、泰乐霉素，是美国于1959年从弗氏链霉菌(streptomyces fradiae)的培养液中获得的一种大环内酯类抗生素，对支原体有特效，对多种g 菌具有很强的抗菌作用，还对部分g-菌、弯杆菌、螺旋体及球虫具有抑制作用。其产品形式有酒石酸盐、磷酸盐、盐酸盐、硫酸盐及乳酸盐，易溶于水，被广泛的应用于畜牧业的畜禽疾病防治及促生长的饲料添加剂。2006年欧盟成员国禁止使用抗生素作为促生长剂。欧盟对肉制品中泰乐菌素的最高残留量规定为100μg/kg。我国农业部在2002年公告的《关于动物性食品中兽药最高残留的通知》中，规定泰乐菌素在鸡、猪、牛的肌肉、脂肪、肝、肾组织中的最高残留量为200μg/kg。
(1) 样品提取
称取5.0g(精确到0.01g)均质好的样品，置于50ml离心管中，加入20ml 乙腈，用均质器均质1min，在振荡器上振荡10min，4200rpm离心5min，取上清液于另一50ml离心管中；再加入20ml乙腈于样品残渣，重复提取一次，合并上清液于50ml离心管中，用乙腈定容至50ml。移取10ml提取液，加入30ml正己烷，涡旋振荡2min，以4200rpm离心5min，弃去正己烷，下层提取液于50℃水浴氮气浓缩至近干。用10ml磷酸盐缓冲液分两次溶解残留物，作为待净化液。
(2) 净化方法
先将cleanert® pep-2 (500mg/6ml)小柱分别用5ml甲醇，5ml水，5ml磷酸盐缓冲液活化平衡；然后将待净化液过柱(流速控制在1ml/min)；用5ml水和5ml甲醇-水(2 8)洗柱，弃去全部流出液，小柱用真空泵抽干30min；最后用10ml甲醇洗脱。收集洗脱液于45℃氮气吹干，用1ml 10%甲醇-水溶液溶解残留物，过0.22μm滤膜后待测。
(3) 检测方法
3.1 色谱条件
色谱柱：venusil mp c18， 2.1×50mm，5μm，100å；
流动相：a相-0.1%甲酸水，b相-0.1%甲酸乙腈
柱 温：30℃；
进样量：10μl；
梯度洗脱：见表1
时间(min) | 流速 (ml/min) | a/% | b/% |
0 | 0.3 | 80 | 20 |
1 | 0.3 | 80 | 20 |
2.5 | 0.3 | 5 | 95 |
4 | 0.3 | 5 | 95 |
6 | 0.3 | 80 | 20 |
15 | 0.3 | 80 | 20 |
3.2 质谱条件
离子源：电喷雾离子源 扫描方式：正离子扫描
电喷雾电压：5500 v 雾化气压力：50 psi
气帘气压力：15 psi 辅助气压力：45 psi
离子源温度：550℃ 采集方式：多反应监测(mrm)
q1、q3均为单位分辨率
质谱参数(见表2)
(4) 实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测泰乐菌素，加标量为4.0μg/kg、20.0μg/kg加标回收率在80%~100%之间，rsd值小于10%，能够满足检测要求。由图1和图2可看出经cleanert® pep-2固相萃取柱净化，采用venusil mp c18色谱柱检测得到的泰乐菌素峰形良好，且保留时间稳定。
图1 泰乐菌素样品加标4.0μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图：
图2 泰乐菌素样品加标20.0μg/kg 液相色谱/ 串联质谱质量色谱图：
结论：
本实验建立了泰乐菌素残留量的lc-ms/ms检测方法，并结合固相萃取技术对猪肉中泰乐菌素的含量进行了测定。对于加标量为4.0μg/kg、20.0μg/kg的样品进行了检测，回收率在80%~100%，符合国标要求。固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中泰乐菌素的残留量。
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
venusil mp c18 | 5μm,100å,2.1×50mm | va950502-0 |
cleanert pep-2 | 500mg/6ml,30/pk | pe5006-2 |
保护柱套 | 适用于4.6×10mm和2.1×10mm | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 5μm,100å,2.1×10mm | va950102-0s |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写32×11.6mm,100/pk | 1109-0519 |
1.5ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫,45．shore a 1.0mm,100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器(nylon) | 13mm,0.22μm,200/pk | as021320 |
一次性注射器 | 2ml两件式 无针头,100/pk | lzsq-2ml |
乙腈uv级 | 4l/瓶,色谱纯 | 015-4 |
正己烷hplc | 4l/瓶,色谱纯 | ah216-4 |
甲醇 | 4l/瓶,色谱纯 | s230-4 |
应用编号：af10040
