苯甲酸、山梨酸和糖精钠是常用饮料及食品等的添加剂。食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定方法有气相色谱法(gc)、薄层色谱法(tlc)和高效液相色谱法(hplc)。
gc 法准确度不够，分离度不好；tlc 法操作复杂，仅可半定量分析； hplc 法可同时测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠。具有方法简便，灵敏度高，选择性好，线性范围宽等优点。
(1) 材料与样品处理
仪器 ：高效液相色谱仪(配紫外检测器)。
试剂：1. 甲醇(ch3oh)色谱纯；
2. 乙酸铵(nh4ac) a.r.；
3. 苯甲酸标准储备液(1.0mg/ml)；
4. 山梨酸标准储备液(1.0mg/ml)；
5. 糖精钠标准储备液(1.0mg/ml)；
6. 纯水 。
(2) 色谱条件
色谱柱：venusil xbp c18 l
4.6mm×250mm 5μm；
波 长：230nm；
流动相：0.02mol/l 乙酸铵：甲醇=(95：5)；
流 速：1.0ml/min；
进样量：20μl；
柱 温：30℃。
在上述色谱条件下，注入20μl 苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准混合液(0.04、0.02、0.04μg/μl)。色谱图见图1
图1 苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准混合液色谱图：
(3) 结果与讨论
3.1 标准曲线绘制
苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准混合液的配制。吸取苯甲酸、山梨酸、糖精钠标准储备液，配制浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10μg/μl 的标准混和液。按上述色谱条件测定峰面积，并绘制校正曲线。见图2～4。由图可见，苯甲酸、山梨酸、糖精钠校正曲线的线性关系良好(相关系数均大于0.99900)。
3.2 苯甲酸、山梨酸和糖精钠测定精密度试验
在上述色谱条件下，连续六次吸取苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准混合液(浓度分别为0.02、0.04、0.04μg/μl)20μl注入色谱仪，分别绘制色谱图。见图5。
图5 苯甲酸、山梨酸和糖精钠测定精密度试验色谱图：
a) 保留时间测定精密度试验, 见表1。
表1 苯甲酸、山梨酸和糖精钠保留时间测定结果：
保留时间(min)
序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | x | rsd (%) |
苯甲酸 | 7.68 | 7.71 | 7.73 | 7.72 | 7.7 | 7.68 | 7.71 | 0.23 |
山梨酸 | 11.45 | 11.46 | 11.46 | 11.48 | 11.45 | 11.47 | 11.46 | 0.16 |
糖精钠 | 13.03 | 13.04 | 13.01 | 13 | 13.02 | 13.04 | 13.02 | 0.18 |
b) 峰面积测定精密度试验，见表2。
表2峰面积测定结果：
序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | x | rsd (%) |
苯甲酸 | 410340 | 417637 | 414726 | 417188 | 416931 | 414295 | 415186 | 0.66 |
山梨酸 | 1215050 | 1219898 | 1213735 | 1221379 | 1220207 | 1221513 | 1216228 | 0.88 |
糖精钠 | 1345875 | 1369706 | 1359273 | 1370641 | 1365946 | 1362443 | 1362314 | 0.67 |
由表1～2 可见，苯甲酸、山梨酸和糖精钠保留时间相对标准偏差(rsd)范围为0.39～0.74%；峰面积相对标准偏差(rsd)范围为0.66～0.88%。表明仪器系统测定精密度良好。
3.3 内控样品测定
用可口可乐饮料作基质，配制含苯甲酸、山梨酸和糖精钠浓度分别为0.04、0.02、0.04μg/μl 的内控样品。按相关文献进行样品预处理。在同样条件下测定苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量。结果分别为0.0400、0.0198、0.0396μg/μl。
3.4 结论
高效液相色谱仪及色谱柱 venusil xbp c18 l (4.6mm×250mm，5μm)，测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠，具有灵敏度高、结果准确、精密度和线性关系良好、出峰时间快、峰形好、分离度好等特点。适用于饮料、食品等中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定。
(4) 订货信息：
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
venusil xbp c18(l) | 4.6×250mm, 5μm | vx952505-l |
针式过滤器(nylon) | 0.45μm,直径13mm,200/pk | as021345 |
一次性无针头注射器 | 5ml, 100/pk | zsq-5ml |
1.5ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写32×11.6mm, 100/pk | 1109-0519 |
1.5ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫,45.shore a 1.0mm,100/pk | 0915-1819 |
甲醇 | 4×4l/箱 | ah230-4 |
乙腈 | 4×4l/箱 | ah015-4 |
应用编号：af10047
