(1) 三聚氰胺标准溶液配制
称取三聚氰胺标样10.0mg，加流动相溶解定容至100ml，即得浓度为100mg/l的三聚氰胺标样溶液。将浓度为100mg/l的三聚氰胺标准溶液分别用水稀释成浓度为1mg/l、5mg/l、10mg/l、15mg/l、20mg/l的标准品溶液，用0.45μm滤膜过滤后进液相色谱检测。
(2) 样品提取
将鸡蛋打开搅匀，分别称取1.00g鸡蛋样本置于10ml具塞离心管中，分别加入1 0 0 m g / l三聚氰胺标样溶液10μl、20μl、100μl，分别得到添加浓度为1.0mg/kg、
2.0mg/kg、10.0mg/kg的样本。往装有上述样本的具塞离心管中分别加入10ml 1%三氯乙酸溶液，2ml 5%醋酸铅溶液，摇匀，超声20分钟，8000rpm离心10分钟，全部上清液转入固相萃取仪上样管中。
cleanert pcx混合型阳离子交换固相萃取柱，标记序号依次放入qdauratm卓睿全自动固相萃取仪中，上样管中放置对应样品，设定操作程序如下：3ml甲醇，3ml水依次活化，加样，3ml水，3ml甲醇淋洗，抽干，最后用5ml5%的氨化甲醇洗脱(v/v)，接收洗脱液(以上操作流速均为1ml/min)，取出收集管于50℃氮气吹干，用1ml流动相定容，0.45μm滤器过滤后进液相色谱检测。
3. 色谱条件：
色谱柱：venusil asb c8，4.6×250mm，5μm；
流动相：乙腈：10mm/l柠檬酸 10mm/l庚烷磺酸钠
缓冲液=7：93(ph为3.0)
波 长：240nm； 流 速：1ml/min； 进 样：20μl。
(4) 实验结果：
4.1 峰型与分离度
分别移取浓度为1.0mg/l、5.0mg/l的三聚氰胺标准溶液，分别连续进样6次，结果如表1所示。
由表1结果可见，本方法具有很好的精密度和重现性。
图1 鸡蛋空白样品和鸡蛋添加10ppm 的样品图谱：
表1 保留时间与峰面积的稳定性数据：
浓度mg/ml | 指标 | 1# | 2# | 3# | 4# | 5# | 6# | 平均值 | rsd% |
1 | 保留时间(min) | 18.83 | 18.829 | 18.829 | 18.838 | 18.84 | 18.834 | 18.833 | 0.026 |
峰面积 | 89 | 81 | 84 | 88 | 84 | 80 | 84 | 4.286 | |
5 | 保留时间(min) | 18.949 | 18.952 | 18.947 | 18.949 | 18.95 | 18.946 | 18.949 | 0.011 |
峰面积 | 423 | 440 | 438 | 439 | 437 | 438 | 436 | 1.461 |
4.2 标准校正曲线
根据表2数据计算线性方程为：y = 87.43x - 13.67，r² = 0.999 ，相关曲线见图2。
结果显示，该方法在1～20mg/kg范围内线性关系良好。
表2 标准校正曲线实验数据
浓度mg/kg | 峰面积第1次进样 | 峰面积第2次进样 | 峰面积均值 |
1 | 89 | 79 | 84 |
5 | 423 | 440 | 431 |
10 | 832 | 844 | 838 |
15 | 1265 | 1299 | 1282 |
20 | 1689 | 1823 | 1756 |
图2 浓度与峰面积的回归曲线
结果显示，该方法在1~20mg/kg范围内线性关系良好。
4.3 添加回收率
由表3可见，本方法检测鸡蛋中三聚氰胺回收率较好
表3 添加浓度与回收率数据：
添加浓度 (mg/kg) | 峰面积 | 计算含量 | 回收率(%) |
1 | 19.9 | 1.158892 | 115.89 |
1 | 21 | 1.214532 | 121.45 |
2 | 41.7 | 2.261587 | 113.08 |
2 | 40.8 | 2.216062 | 110.8 |
10 | 188.8 | 9.702247 | 97.02 |
10 | 219.6 | 11.26018 | 112.6 |
(5) 结论
通过上述实验可见，运用本方法测定鸡蛋中三聚氰胺，基质净化效果好，杂质干扰小，色谱峰型良好对称度高，操作简单方便，和准确度高等优点，非常适用于鸡蛋中三聚氰胺的检测。
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
三聚氰胺标准品(≥99.0%) | 100g/pk | sj-sjqa-100 |
庚烷磺酸钠(色谱级) | 25g | ion-q7-25 |
lc-10f高效液相色谱仪 | 10ml/min, 梯度系统,200-800nm双波长检测器 | fl-lc010gs |
cc-100分析型色谱柱温箱 | 温控范围：5~70℃；可安装1-2支300mm色谱柱 | cc-100 |
qdaura卓睿全自动固相萃取仪 | 4通道24位 | spe-40 |
cleanert pcx | 60mg/3ml, 50/pk | cx0603 |
venusil asb c8液相色谱柱 | 4.6×250mm, 5μm | vs852505-0 |
针式过滤器(nylon) | 0.45μm,直径13mm,200/pk | as021345 |
一次性无针头注射器 | 5ml, 100/pk | zsq-5ml |
1.5ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写32×11.6mm, 100/pk | 1109-0519 |
1.5ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫,45．shore a 1.0mm,100/pk | 0915-1819 |
甲醇 | 4×4l/瓶 | ah230-4 |
应用编号：af10048
