gb/t 19681-2005《食品中苏丹红染料的检测方法 高效液相色谱法》中采用正己烷作为萃取溶剂，用氧化铝固相萃取柱净化样品。该方法样品处理过程复杂，且氧化铝的活性不易控制，回收率难以得到保证。
本实验利用装填具有芳香性功能基团的聚合物材料的cleanert sudan固相萃取柱萃取辣椒油、辣椒粉等食品中4种苏丹红，然后再用二氯甲烷洗脱，开发了一套食品中4种苏丹红检测的新方法，与国标方法相比，可获得更稳定的回收率，溶剂用量更少更环保，方法也更简便。
(1) 样品提取及净化
1.1 辣椒粉等粉状样品
称取0.5g(准确至0.001g)样品于三角瓶中，加入5ml正己烷，超声10min，过滤，将滤液于5000r/min下离心5min后取上清液3ml，待净化。
加标样品的处理：向0.5g(准确至0.001g)辣椒粉中加入2ml的4μg/ml苏丹红混标以及4ml正己烷，然后按照上述方法进行预处理。
1.2 辣椒油等油状样品
称取0.5g(准确至0.001g)样品于小烧杯中，加入3ml正己烷溶解，涡旋1分钟混匀，待净化。
加标样品的处理：向0.5g(准确至0.001g)辣椒油样品中加入1ml的4μg/ml苏丹红混标，然后按照上述方法进行处理。
1.3 火腿肠类样品
将火腿肠切成小丁，称取3.0g(准确至0.001g)，放入10ml离心管中，加入5ml正己烷，超声10min，5000r/min离心5min后取上清液3ml，待净化。
加标样品的处理：将火腿肠切成小丁，称取3.0g(准确至0.001g)，放入10 ml离心管中，加入2ml的4μg/ml苏丹红混标以及4ml正己烷，然后按照上述方法进行处理。
1.4 火锅底料等酱类样品
称取火锅底料1.0g(准确至0.001g)，加入1ml水，再加5ml正己烷，涡旋3分钟，超声10分钟，接着以转速6000r/min离心5分钟，取上层有机相3ml，加入无水硫酸钠0.5g，涡旋0.5分钟，静置取上清液作为上样液。
加标样品的处理：向1.0g(准确至0.001g)火锅底料中加入1ml水，再加2ml的4μg/ml苏丹红混标及4ml正己烷，然后按照上述方法进行处理。
(2) 净化方法
净化样品所用固相萃取柱为cleanert sudan苏丹红专用柱(500mg/6ml)
1. 活化：在cleanert sudan苏丹红专用柱中依次加入5ml二氯甲烷，5ml正己烷。
2. 萃取：将3.1中的待净化液加入cleanert sudan柱中，再用1ml正己烷洗涤样品瓶，一并加入spe柱中，流出液弃去。
3. 淋洗：待上样液完全流出后，用3ml 3%异丙醇-正己烷溶液淋洗，淋洗液弃去，开启真空泵，将小柱抽干。
4. 洗脱：3ml二氯甲烷洗脱，收集洗脱液。
5. 吹干与定容：将洗脱液于50℃下氮气吹干，加入1ml乙腈溶解，使用0.45μm ptfe有机滤膜过滤后，进行hplc分析。
(3) 色谱条件
色谱柱：venusil mp c18 5μm 100å，4.6×150mm
流动相：乙腈：水=97：3(v/v)
流 速：1.0ml/min
进样量：20μl
柱 温：35℃
检测波长：520nm
(4) 实验结果
液相色谱条件下，将浓度为4μg/ml的标准溶液进行hplc分析，得到4种苏丹红标准溶液色谱图如图1所示。
图1 4 种苏丹红标准溶液液相色谱图:
苏丹红ⅰ、ⅱ、ⅲ、ⅳ保留时间分别为：4.498min、6.673min、8.923min、14.165min。
经由上述样品处理方法处理的辣椒粉、辣椒油、火腿肠、火锅底料及其加标样品，经hplc分析，得到色谱图见图2~图9。
图2 辣椒粉样品的液相色谱图:
图3 辣椒油样品的液相色谱图:
图4 火腿肠样品的液相色谱图:
图5 火锅底料样品的液相色谱图:
表2 4 种样品中苏丹红的平均加标回收率及rsd 值:
样品名 | 组分 | 低浓度(0.4mg/l) | 高浓度(4mg/l) | ||
平均回收率/% | rsd(n=5)/% | 平均回收率/% | rsd(n=5)/% | ||
辣椒粉 | 苏丹红ⅰ | 96.00% | 5.02 | 96.00% | 5.02 |
苏丹红ⅱ | 95.19% | 1.42 | 95.19% | 1.42 | |
苏丹红ⅲ | 98.82% | 1.62 | 98.82% | 1.62 | |
苏丹红ⅳ | 97.16% | 3.73 | 97.16% | 3.73 | |
辣椒油 | 苏丹红ⅰ | 93.42% | 4.35 | 93.42% | 4.35 |
苏丹红ⅱ | 91.67% | 8.46 | 91.67% | 8.46 | |
苏丹红ⅲ | 100.29% | 4.43 | 100.29% | 4.43 | |
苏丹红ⅳ | 100.01% | 3.83 | 100.01% | 3.83 | |
火腿肠 | 苏丹红ⅰ | 90.63% | 3.89 | 90.63% | 3.89 |
苏丹红ⅱ | 87.60% | 6.1 | 87.60% | 6.1 | |
苏丹红ⅲ | 101.29% | 3.89 | 101.29% | 3.89 | |
苏丹红ⅳ | 92.68% | 8.19 | 92.68% | 8.19 | |
火锅底料 | 苏丹红ⅰ | 99.67% | 5.53 | 99.67% | 5.53 |
苏丹红ⅱ | 87.95% | 4.67 | 87.95% | 4.67 | |
苏丹红ⅲ | 99.02% | 5.56 | 99.02% | 5.56 | |
苏丹红ⅳ | 91.05% | 7.4 | 91.05% | 7.4 | |
结论
cleanert sudan能很好去除油脂中的杂质，可获得稳定的苏丹红加标回收率，样品前处理的操作过程简单，所需耗材少。辣椒粉、辣椒油、火腿肠和火锅底料这四种不同的实验样品中4种苏丹红的加标回收率都较理想。
(5) 订货信息:
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
cleanert sudan | 500mg/6ml,30/pk | sd5006 |
venusil mp c18 | 5μm,100å,4.6mm×150mm | va951505-0 |
氮吹仪 | 15位 | nv-15g |
1.5ml样品瓶 | 1.5ml, 100/pk | 1109-0519和av2100-0 |
20ml玻璃瓶 | 20ml, 100/pk | av7100-7和 av7920-0 |
12ml样品瓶 | 20ml, 100/pk | 1509-1800和1515-1748 |
ptfe滤头 | 0.45μm,直径13mm,200/pk | as041345 |
正己烷 | 4×4l/瓶 | ah216 |
二氯甲烷 | 4×4l/瓶 | ah300 |
乙腈 | 4×4l/瓶 | ah015-4 |