1. 实验材料
1.1 糖皮质激素类药物标准品
表1 糖皮质激素类药物标准品信息
中文名 | 英文名 | cas号 | 相对分子质量 |
泼尼松龙 | prednisone | 50-24-8 | 360.1937 |
氢化可的松 | hydrocortisone | 50-23-7 | 362.2093 |
泼尼松 | prednisone | 1953-3-2 | 358.178 |
可的松 | cortisone | 1953-6-5 | 360.1937 |
甲基泼尼松龙 | methylprednisolone | 83-43-2 | 374.2093 |
倍他米松 | betamethasone | 378-44-9 | 392.1999 |
地塞米松 | dexamethasone | 1950-2-2 | 392.1999 |
曲安奈德 | triamcinolone acetonide | 76-25-5 | 434.2105 |
氢化可的松醋酸酯 | hydrocortisone 21-acetate | 1950-3-3 | 404.22 |
泼尼松醋酸酯 | prednisone 21-acetate | 125-10-0 | 400.1886 |
可的松醋酸酯 | cortisone 21-acetate | 1950-4-4 | 402.2042 |
1.2 标准储备液及混合标准工作液的配置
分别精密称取适量的 11 种糖皮质激素标准品，用甲醇溶解定容，分别配制成 1000 μg/ml 的贮备液。-20℃ 以下保存。
混合标准工作液：准确量取糖皮质激素类药物标准贮备液适量，用20%乙腈水溶液稀释成适宜浓度的混合标准工作液，现配现用。
1.3 标准储备液及混合标准工作液的配置
a) 10% 亚铁氰化钾溶液：称量 2.3 g k4fe(cn)6•3h2o，用水溶解定容至 20 ml；
b) 20% 乙酸锌溶液：称量 4.78 g c4h6o4zn•2h2o，用水溶解定容至 20 ml；
c) 定容液：量取 70 ml水 和 30 ml 乙腈，混匀后加入100 μl 甲酸混匀。
2. 样品提取
霜膏类化妆品：称取 0.2 g 试样 (精确至 0.01 g)于 50ml 离心管，混匀。加入 3 ml 饱和氯化钠溶液，涡旋混合使样品分散，加入 3 ml 乙腈，超声提取 5 min，8000 r/min离心 5 min，吸取上层清液于另一 50 ml 离心管中，下层氯化钠溶液用 2 ml 乙腈重复提取一次，合并两次乙腈提取液，往提取液加入 40 ml 去离子水，混匀，加入亚铁氰化钾溶液 0.2 ml，混匀，加入乙酸锌溶液 0.2 ml，混匀，8000 r/min 离心 10 min，作为待净化液。
精油类样品：称取 0.5 g 试样 (精确至 0.01 g)于 50 ml离心管，混匀。加入 4 ml 正己烷，涡旋混合使样品分散，加入4 ml 50%乙腈水溶液，涡旋提取2 min，8000 r/min离心5 min，吸取下层提取液，上层正己烷用4 ml 50%乙腈水溶液重复上述提取步骤一次，合并二次50%乙腈提取液，往提取液加入36 ml去离子水，混合，加入亚铁氰化钾溶液0.1ml，混匀，加入乙酸锌溶液 0.1 ml，混匀，8000 r/min 离心10 min，作为待净化液。
3. 固相萃取柱净化
将 cleanert®pep-2 固相萃取小柱置于 qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪，上样液转移至上样管中，溶剂置于相应的溶剂瓶中，设定操作程序如下：用 5 ml 甲醇、10 ml 水活化。将上样管中溶液全部上样，然后以 10 ml 10% 乙腈水溶液淋洗小柱，通气吹干小柱中的残留液 (5 min)。最后以 6 ml 甲
醇洗脱小柱，通气吹干小柱中的残留液 (5 min)，以上操作流速均设定为 1 ml/min。取出收集瓶，于 40℃氮气吹干，用 1ml 定容液溶解定容，过 0.22 μm nylon 滤器，待测。
4. 检测条件
4.1 液相色谱条件
色谱柱：venusil® asb c18，3 μm，150 å，2.1 × 150 mm；
柱温：30℃；
进样量：10 μl。
流动相：a 相：含 0.1% 甲酸的水溶液；b 相：含 0.1% 甲酸的乙腈溶液；
梯度洗脱程序见表4
表2 流动相梯度洗脱条件和流速
时间(min) | 流速(μl/min) | a相(%) | b相(%) |
0 | 200 | 68 | 32 |
3 | 200 | 68 | 32 |
10 | 200 | 25 | 75 |
15 | 200 | 15 | 85 |
15.01 | 200 | 68 | 32 |
25 | 200 | 68 | 32 |
4.2 液相色谱条件
离子源：电喷雾离子源； 扫描方式：负离子扫描；
检测方式：多反应监测； is：-4500v；gs1：55psi； gs2：55psi；tem：550℃；
表3 糖皮质激素类药物多反应监测的优化参数
注：带“____”的监测离子为定量离子。
图1 11 种糖皮质激素sim 图
5. 结果与讨论
以市售玫瑰精油和护手霜为基质，进行添加回收实验，进行0.1 μg/g 和 0.05 μg/g 添加浓度的实验，11 种糖皮质激素的回收率和重现性如下：
表4 玫瑰精油0.1 μg/g 添加回收实验结果
药物名称 | 平行1 | 平行2 | 平行3 | 平均回收率 | rsd |
泼尼松 | 85.19% | 85.65% | 76.98% | 82.61% | 5.90% |
泼尼松龙 | 91.68% | 90.70% | 81.07% | 87.82% | 6.68% |
可的松 | 93.67% | 92.11% | 82.38% | 89.39% | 6.84% |
氢化可的松 | 84.56% | 89.38% | 86.89% | 86.94% | 2.77% |
甲基泼尼松龙 | 94.08% | 82.90% | 84.75% | 87.24% | 6.87% |
倍他米松 | 89.74% | 90.28% | 80.51% | 86.84% | 6.33% |
地塞米松 | 103.10% | 93.90% | 89.10% | 95.37% | 7.46% |
可的松醋酸酯 | 87.19% | 87.40% | 92.02% | 88.87% | 3.07% |
泼尼松醋酸酯 | 119.07% | 119.86% | 111.63% | 116.85% | 3.89% |
氢化可的松醋酸酯 | 91.12% | 91.69% | 87.43% | 90.08% | 2.57% |
曲安奈德 | 98.72% | 84.57% | 87.15% | 90.14% | 8.36% |
表5 玫瑰精油0.05 μg/g 添加回收实验结果
药物名称 | 平行1 | 平行2 | 平行3 | 平均回收率 | rsd |
泼尼松 | 78.32% | 75.44% | 86.69% | 80.15% | 7.29% |
泼尼松龙 | 85.75% | 85.75% | 86.16% | 85.88% | 0.28% |
可的松 | 86.99% | 77.29% | 88.46% | 84.25% | 7.20% |
氢化可的松 | 72.36% | 69.15% | 75.04% | 72.18% | 4.08% |
甲基泼尼松龙 | 84.80% | 88.74% | 99.95% | 91.16% | 8.62% |
倍他米松 | 76.19% | 85.32% | 95.32% | 85.61% | 11.18% |
地塞米松 | 80.38% | 79.99% | 90.64% | 83.67% | 7.22% |
醋酸酯可的松 | 86.52% | 93.17% | 107.36% | 95.68% | 11.13% |
泼尼松醋酸酯 | 119.39% | 107.72% | 111.49% | 112.87% | 5.28% |
氢化可的松醋酸酯 | 94.54% | 110.02% | 103.75% | 102.77% | 7.58% |
曲安奈德 | 94.10% | 73.98% | 90.74% | 86.27% | 12.49% |
表6 护手霜0.1 μg/g 添加回收实验结果
药物名称 | 平行1 | 平行2 | 平行3 | 平均回收率 | rsd |
泼尼松 | 98.47% | 96.35% | 87.64% | 94.16% | 6.09% |
泼尼松龙 | 104.71% | 106.49% | 100.10% | 103.76% | 3.18% |
可的松 | 99.64% | 93.01% | 97.16% | 96.60% | 3.47% |
氢化可的松 | 91.60% | 90.07% | 95.88% | 92.51% | 3.26% |
甲基泼尼松龙 | 107.41% | 102.56% | 101.39% | 103.79% | 3.07% |
倍他米松 | 105.77% | 100.40% | 105.90% | 104.02% | 3.02% |
地塞米松 | 99.96% | 97.00% | 100.11% | 99.02% | 1.77% |
可的松醋酸酯 | 124.48% | 119.24% | 111.62% | 118.44% | 5.46% |
泼尼松醋酸酯 | 104.31% | 93.72% | 90.30% | 96.11% | 7.60% |
氢化可的松醋酸酯 | 103.96% | 114.47% | 114.17% | 110.86% | 5.40% |
曲安奈德 | 94.97% | 111.77% | 93.30% | 100.01% | 10.22% |
实验结论：使用 cleanert® pep-2、venusil® asb c18，api 4000 plus 三重四级杆质谱仪进行定量分析，建立了一种化妆品中 11 种糖皮质激素同时检测的分析方法，在高低添加水平下，11 种糖皮质激素的平均回收率为75%-120%；相对标准偏差均小于 13%。实验结果表明本方法快速、准确，可用于化妆品中糖皮质激素的检测。
6. 订货信息
产品名称 | 规格包装 | 订货号 |
qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪 | 4 通道 24 位 | spe-40 |
cleanert® pep-2 固相萃取柱 | 150 mg/6 ml，30支/pk | pe1506-2 |
venusil® asb c18 液相色谱柱 | 2.1 ×150 mm，3 μm，150å | vs931502-0 |
针式过滤器 (nylon) | 0.22 μm，直径 13mm，200/pk | as021320 |
一次性无针头注射器 | 5 ml，100/pk | zsq-5ml |
1.5 ml 样品瓶 | 短螺纹透明带书写 32 × 11.6 mm，100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml 样品瓶盖 | 9 mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 ptfe 隔垫，45．shore a 1.0 mm，100/pk | 0915-1819 |
甲醇 | 4 × 4 l/箱 | ah230-4 |
乙腈 | 4 × 4 l/箱 | ah015-4 |
应用编号：af10054
