参考方法
博纳艾杰尔内部方法。
香兰素亦称香草素、香草醛等，学名为 3-甲氧基-4-羟基苯甲醛，根据欧盟专家委员会2000年 2 月 24 日报道，大剂量可导致头痛，恶心，呕吐，呼吸困难，甚至损伤肝肾功能。
限量标准
中华人民共和国国家标准《食品添加剂使用标准》(gb2760-2011) 规定，较大婴儿和幼儿配方食品中香兰素最大使用量为 5mg / 100ml，其中 100 ml 以即食食品计，生产企业应按照冲调比例折算成配方食品中的使用量；婴幼儿谷类辅助食品中可以使用香兰素，最大使用量为 7mg / 100g，其中 100 g 以即食食品计；凡使用范围涵盖 0 至 6 个月婴幼儿配方食品不得添加任何食用香料。国家标准中只规定了限值，未有检测方法。本实验使用天津博纳艾杰尔科技有限公司的 cleanert® pax 固相萃取小柱和 venusil® xbp c18(l) 液相色谱柱，建立了一种奶粉中香兰素的检测方法，经实验验证，该方法简单、快速、准确度高。
实验材料
水(ph=4.5)：取 100 ml 水，用乙酸调节 ph 至 4.5；
2%乙酸铅溶液：称取乙酸铅 2 g，加水稀释并定容至100 ml；
5% 氨水溶液：取氨水溶液 5 ml，加水稀释并定容至100 ml；
5% 酸化甲醇：取甲酸5 ml，加甲醇95 ml混匀；
香兰素储备液(1mg / ml)：准确称取香兰素标准 10 mg，加水稀释并定容至 10 ml；
固相萃取柱：cleanert® pax (规格为 60mg / 3ml)，使用前分别用 3 ml 甲醇和 3 ml 水活化；
液相色谱柱：venusil® xbp c18(l)5 μm，150 å，4.6×150 mm；
针式过滤器：亲水型 ptfe (0.45 μm，13 mm)。
lc-10f 高效液相色谱系统；
qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪；
高速离心机 (转子 50 ml×6)；
氮吹仪；
12 位固相萃取装置。
实验步骤
准确称取奶粉试样 1 g(精确至 0.01 g)于 50 ml离心管中，加入 ph=4.5 的水溶液 5 ml，混匀超声提取 5 min，加2% 乙酸铅溶液 2 ml，混匀后静置 2 min，8000 r/min 离心 10min；取上清液用 5% 氨水溶液调节 ph 至中性；将上清液全部加样至活化好的 cleanert® pax 小柱，然后分别用 3 ml 5% 氨水溶液和 3 ml 甲醇淋洗小柱，弃去淋洗液；用 3 ml 5% 酸化甲醇洗脱(以上固相萃取操作通过 qdaura®卓睿全自动固相萃取仪完成)，收集洗脱液于30℃下氮气吹干，用 1ml 流动相重新溶解，过滤，待测。
色谱条件
色谱柱：venusil® xbp c18(l)，5 μm，150 å， 4.6×150 mm；
流动相：a (0.02 mol/l 的磷酸二氢钾溶液，磷酸调节 ph=4.0):b (乙腈) = 90:10；
流速：1.0 ml/min； 进样量：20 μl；
波长：276 nm； 柱 温：30℃。
实验结果及谱图
量取一定量香兰素标准储备液，分别用水稀释至 1 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、25 μg/ml 和 50 μg/ml，按照4检测条件依次进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合标准曲线方程，结果见表1；表2，3为回收率结果实验。
表1 香兰素标准曲线和检出限
标准曲线方程 | 相关系数 | 检出限(s/n>3) |
y=86.443x 36.907 | 0.9998 | 1μg/g |
表2. 5 μg/g 添加回收实验结果
回收率 | 平行1 | 平行2 | 平行3 | 平均回收率 | rsd |
89.03% | 94.30% | 90.67% | 91.33% | 2.70% |
表3. 25μg/g 添加回收实验结果
回收率 | 平行1 | 平行2 | 平行3 | 平均回收率 | rsd |
85.08% | 87.85% | 83.59% | 85.51% | 2.16% |
图1 奶粉空白谱图
图2. 5 μg/g 添加谱图
图3. 1 μg/g 标准溶液谱图
6. 订货信息
名称 | 规格 | 订货号 |
分析型高效液相色谱仪 | 10 ml/min，等度系统， | fl-lc010 |
分析型色谱柱温箱 | 200-400 nm 双波长检测器 | cc-100-t |
qdaura® 卓睿全自动固相萃取仪 | 4 通道24 位连续处理 | spe-40 |
甲醇 | 色谱纯，4×4 l/ 箱 | ah230-4 |
乙腈 | 色谱纯，4×4 l/ 箱 | ah015-4 |
cleanert® pax 固相色谱柱 | 60mg / 3ml，50 支/ 盒 | ax0603 |
venusil® xbp c18(l) 液相色谱柱 | 5 μm，150 å，4.6×150 mm | vx951505-l |
保护柱芯 | 4.6×10 mm，4/pk | vx950105-l |
保护柱套 | 适用于4.6×10 mm 的保护柱芯 | ch-100 |
针式过滤器 | ptfe(亲水)，0.45 μm，13 mm，200/pk | as081345 |
一次性注射器 | 2 ml 无针头，两件式，100 支/pk | lzsq-2ml |
溶剂过滤器 | 1 l | am3100 |
1.5 ml 样品瓶 | 短螺纹，透明，带书写处，100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml 样品瓶盖 | 预组装：9 mm 中心孔，螺纹盖；红色橡胶/ 米色 | 0915-1819 |
12 样品瓶 | ptfe 隔垫，100/pk | 1509-1657 |
12 ml 样品瓶盖 | 透明，螺纹口，100/pk | 1515-1748 |
微孔滤膜 (mcm) | 预组装：15 mm 黑色实心盖；红色丁基/ 灰色ptfe | am015045 |
微孔滤膜 (nylon) | 隔垫，100/pk | am025045 |
离心机 | 50 mm，0.45 μm，100片/pk | tgl-10b |
氮吹仪 | 50 mm，0.45 μm，100片/pk | nv15-g |
真空固相萃取缸 | 最大转速10000 r/min | vm12 |
流速调节阀 | 15 位 | a81213 |
穿板导流针 | 12 位 | a80100 |
无油隔膜真空泵 | 12 个/ 包 | a01003 |
应用编号：af10021
