2019年新冠病毒的确诊包含rt-pcr法、ct影像、基因测序等方法，其中rt-pcr核酸检测体系中所用引物与探针均为寡聚核苷酸（oligo）。那么oligo的研发生产过程中，其表征与纯化对于色谱柱的要求是怎样呢？
反相作为lc上分辨率较高且常使用的模式，而oligo因为磷酸二酯链、核糖/脱氧核糖以及极性碱基的存在，使其在反相色谱柱上保留非常弱，故需在流动相中添加弱离子对试剂-烷基胺如tea、diea。此外，也会添加hfip改善峰形。
相比传统硅胶色谱柱，phenomenex推出的杂化基质硅胶色谱柱clarity oligo-xt和clarity oligo-rp更耐受这样苛刻的溶剂环境，对oligo也具有更佳的选择性。oligo-xt采用了核壳技术，更大程度提高分辨率；oligo-rp则采用全多孔杂化硅胶，可实现oligo的高载样量，专为纯化而设计。
桥接寡核苷酸的分析示例
column: clarity 2.6μm oligo-xt
dimensions: 50x2.1mm
mobile phase:
a:50mm hfip & 5mm diea in water
b:50mm hfip & 5mm diea in acetonitrile
flow rate: 0.3ml/min
gradient: 5-20%b in 15 min to 95%wash for 5 min
temperature: 60°
detection: uv/vis 260 nm
sample:bridged nucleic acid 5'-ta/bna-a/ta/bna-mec/gt/bna-t/ta/bna-t/ac/bna-g/cc/bna-c/a-3'
寡核苷酸的纯化示例
column: clarity 3μm oligo-rp c18
dimensions: 50x10mm
mobile phase:
a:50mm teaa ph 7.5
b:methanol
flow rate: 5ml/min
gradient: 10-45%b in 30minutes
detection:uv/vis 260 nm
sample:39mer & 40mer dna
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