前言
三氯蔗糖是以蔗糖为原料经氯代而制得的一种非营养型强力甜味剂，是一种白色粉末状产品，极易溶于水，水溶液澄清透明，其甜度是蔗糖的400~800倍。其中，食品包装成分表中常能看到的蔗糖素（学名三氯蔗糖），虽然所含热量少，但吃多了也会胖，而且还可能阻碍身体对一些药物的吸收。
因此通过有效的实验技术手段，对食品中的有关三氯蔗糖残留进行监控，以确保消费者对食品消费的安全具有重要意义。
本实验通过优化前处理方法建立了三氯蔗糖在食品中的高效液相色谱的方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪（蒸发光检测器）；博纳艾杰尔12位负压spe装置。
试剂材料
甲醇、乙腈、正己烷为色谱纯；实验用水为超纯水；乙酸锌、亚铁氰化钾均为分析纯；中性氧化铝（100目~200目）
三氯蔗糖标准品（纯度99%）；
乙酸锌溶液：称取21.9 g乙酸锌，加3 ml乙酸，加水溶解至100 ml；
亚铁氰化钾溶液：称取10.6 g亚铁氰化钾，加水溶解至100 ml；
甲醇水溶液：量取75 ml甲醇，加25 ml水，混匀；
乙腈水溶液：量取11 ml乙腈，加89 ml水，混匀。
一次性无菌注射器；尼龙针式过滤器(0.45 µm，直径13 mm)；
cleanert pep-2固相萃取柱：200 mg/6 ml。
样品制备
样品提取
酱油
称取2 g样品置于50 ml离心管中，加入1.0 g中性氧化铝，加入3 ml水，涡旋混匀振荡3 min后，加入15 ml甲醇，继续震荡30 s，超声波提取20 min，3000 r/min离心10 min，上清液移入50 ml离心管中，沉淀物加入5.0 ml甲醇水（3︰1，v/v），涡旋30 s，以3000 r/min,离心10 min，重复提取2次，将上清液合并于150 ml分液漏斗中。
在150 ml分液漏斗中，加入30 ml正己烷，振摇2 min，静置分层，20 min后，下层水相移至于50 ml蒸发皿。蒸发皿于沸水浴上蒸发，当液体在1 ml左右时，用9 ml水分3次冲洗蒸发皿，合并于15 ml离心管中，超声处理5 min，3000 r/min离心10 min，待净化。
可口可乐
称取混匀后试样5 g，置于15 ml离心管中，加入5 ml水，涡旋混合器上振荡30 s，以3000 r/min离心10 min
酸奶
称取混匀后试样2 g置于50 ml离心管中，加入5 ml水，涡旋振荡3 min后加入15 ml甲醇，0.5 ml乙酸锌，0.5 ml亚铁氰化钾，继续震荡30 s，超声波提取20 min，3000 r/min离心10 min，上清液移入50 ml离心管中，沉淀物加入5.0 ml甲醇水（3︰1，v/v），涡旋30 s，以3000 r/min,离心10 min，重复提取2次，将上清液合并于150 ml分液漏斗中
在150 ml分液漏斗中，加入30 ml正己烷，振摇2 min，静置分层，20 min后，下层水相移至于50 ml蒸发皿。蒸发皿于沸水浴上蒸发，当液体在1 ml左右时，用9 ml水分3次冲洗蒸发皿，合并于15 ml离心管中，超声处理5 min，3000 r/min离心10 min，待净化。
样品净化
先将cleanert pep-2 (200 mg/6 ml)小柱分别用4 ml甲醇，4 ml水溶液活化平衡；然后将待净化液过柱；用1 ml水洗柱，弃去全部流出液；最后用3 ml甲醇洗脱。收集洗脱液于50℃氮气吹干，用1 ml乙腈水（11︰89，v/v）溶解残留物，过0.45 µm尼龙针式过滤器滤膜后待测。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil xbp c18 (l)，5 µm，150 å，4.6 × 150 mm
流动相：乙腈︰水=11︰89
柱 温：35℃
进样量：20 µl
蒸发温度：50℃
结果与讨论
实验结果
由表2可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测三氯蔗糖，加标回收率在60% ~ 110%之间，能够满足标准要求。
| 基质名称 | 添加水平/(mg/kg) | 平均回收率/% | rsd/% |
| 酱油 | 500 | 102 | 1.8 |
| 可口可乐 | 200 | 85.5 | 2.4 |
| 酸奶 | 500 | 54.1 | 4.2 |
结论
本实验依据《食品中三氯蔗糖的测定》（gb/t 22255-2014）建立了食品中三氯蔗糖残留量的检测方法，并结合高效液相色谱对食品中三氯蔗糖残留物的含量进行了测定。对于加标量为500 mg/kg、200 mg/kg的样品进行了检测，回收率在60% ~ 110%之间，符合要求。
附：相关产品
| 产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
| venusil xbp c18 (l) | 5 µm，150 å，4.6 × 150 mm | 1支 | vx951505-l |
| cleanert pep-2 | 200 mg/6 ml | 30支/pk | pe2006-2 |
| qdaura® 卓睿全自动固相萃取系统 | 4通道 | 1台 | spe-40 |
| 15位氮吹仪 | 15位 | 1台 | nv15-m |
| 保护柱套 | 适用于4.6 × 10 mm和2.1 × 10 mm | 1支 | sh-100 |
| 直联式保护柱芯 | 5 µm，150 å；2.1 × 10 mm | 4支/包 | vx950105-ls |
| 1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 | 100/pk | 1109-0519 |
| 32 × 11.6 mm | |||
| 1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 | 100/pk | 0915-1819 |
| 45°shore a; 1.0 mm | |||
| 针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.45 µm | 200个/包 | as081345 |
| 一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
| 甲醇 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4 × 4 l/箱 | ah230-4 |
| 乙腈 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4 × 4 l/箱 | ah015-4 |
应用编号：af10079
