局部麻醉药（localanaesthetics），是一类能在用药局部可逆性的阻断感觉神经冲动发生与传递，简称“局麻药”。可卡因由于吸收后毒性大，使用受到限制。人工合成低毒性的普鲁卡因后，使用范围不断扩大。利多卡因则是酰胺类局麻药的典型。目前常用局麻药可分为酯类和酰胺类两大类，芳酸酯类如普鲁卡因，苯佐卡因，丁卡因；酰胺类如利多卡因；
普鲁卡因和利多卡因二者能够竞争性地与神经膜脂蛋白牢固结合，阻碍钠离子渗入及神经纤维的传导，临床上用于浸润麻醉、阻滞麻醉、腰椎麻醉、硬外麻醉和局部封闭化，它们的用量必须适当控制，如果过量会引起皮疹、头昏、眼花、眩晕，重者还会引起震颤、恐慌、休克甚至死亡；苯佐卡因临床用做局部麻醉药，有良好的止痛、止痒作用，主要用于创面、溃疡面、粘膜表面和痔疮麻醉止痛和痒症，具有稳定性好、起效快维持时间长和副作用小等优点；丁卡因具有吸收快、作用强、毒性大等特点。目前化妆品中添加防腐剂、激素、抗生素等等，重金属超标事件时有发生，对人的身体健康造成了一定的危害，而化妆品已成为人日常生活必需品，化妆品安全日益受到关注，健全化妆品检测已迫在眉睫，故本实验建立了化妆品中7种局麻药的检测方法。
仪器、试剂与材料
高效液相色谱柱：venusil xbp c18（l）规格5 μm ，150 å；4.6 × 250 mm ;spe小柱：cleanert pcx 规格60 mg/3 ml
1%三氯乙酸溶液;1%甲酸甲醇溶液;5%氨水甲醇溶液;尼龙针式过滤器：13 mm，0.45 μm
标准储备液：称取一定量利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、普鲁卡因胺、氯普鲁卡因、辛克卡因、苯佐卡因，分别用甲醇溶解定容，配制成1.0 mg/ml的溶液
标准工作液：分别取250 μl上述7种局麻药单标，用甲醇稀释定容至10 ml，配制成25 μg/ml溶液
样品制备
提取
霜类：称取0.5 g霜样品(精确至0.01 g）于离心管中，加入200 μl 25 μg/ml局麻药标准工作液，涡旋混合1 min，加入8 ml 1%三氯乙酸和2 ml乙腈，振荡提取1 min，超声10 min，8000 r/min离心5 min，转移上层清液至另一离心管，待净化。
精油类：称取0.5 g霜样品(精确至0.01 g）于离心管中，加入200 μl 25 μg/ml 局麻药标准工作液，涡旋混合1 min，加入2 ml乙腈饱和正己烷溶液，振荡提取1 min，超声10 min；加入8 ml 1%三氯乙酸和2 ml乙腈，振荡提取1 min，8000 r/min离心5 min，转移上层清液至另一离心管，待净化。
净化
取pcx（60 mg/3 ml）小柱，依次用3 ml甲醇、5 ml1%三氯乙酸活化小柱，将上述待净化样品以1.0 ml/min通过小柱，再依次用3 ml 1%三氯乙酸、3 ml 1%甲酸甲醇溶液淋洗小柱，抽干，最后用10 ml 5%氨水甲醇溶液洗脱小柱，收集洗脱液，40℃氮气浓缩至近干，用1 ml甲醇：水（1:1，体积比）溶解残留物，过0.45 μm尼龙针式过滤器，样品供hplc检测。
注：霜类提取样品上样液、淋洗液在0.25 mpa负压下通过小柱
液相检测条件
色谱柱：venusil xbp c18（l）规格5 μm ，150 å；4.6 × 250 mm
流动相a：20 mmol/l磷酸氢二纳（用磷酸调节ph至7.0）；
流动相b：甲醇
a：40%流动相a，60%流动相b；b：20%流动相a，80%流动相b
波长：220 nm
进样量：20 μl
流速：1.0 ml/min
柱温：30℃
梯度：
时间 | b % |
0 | 0 |
6 | 0 |
7 | 100 |
15 | 100 |
16 | 0 |
30 | 0 |
结果与讨论
实验结果
表1. 精油基质加标回收实验数据（添加水平10 μg/g）
物质名称 | 空白回收率% | 平均加标回收率% | rsd值 % |
普鲁卡因胺 | 0.00 | 102.09 | 0.16 |
苯佐卡因 | 0.00 | 72.77 | 0.33 |
普鲁卡因 | 0.00 | 98.18 | 0.19 |
氯普鲁卡因 | 0.00 | 95.96 | 1.60 |
利多卡因 | 0.00 | 105.55 | 10.23 |
丁卡因 | 0.00 | 115.66 | 14.77 |
辛可卡因 | 0.00 | 98.36 | 0.98 |
表2. 霜基质加标回收实验数据（添加水平10 μg/g）
物质名称 | 空白回收率% | 平均加标回收率% | rsd值% |
普鲁卡因胺 | 0.00 | 84.67 | 3.33 |
苯佐卡因 | 0.00 | 45.88 | 2.04 |
普鲁卡因 | 0.00 | 73.84 | 1.48 |
氯普鲁卡因 | 0.00 | 70.99 | 1.83 |
利多卡因 | 0.00 | 87.39 | 0.54 |
丁卡因 | 0.00 | 99.92 | 1.84 |
辛可卡因 | 0.00 | 95.79 | 2.23 |
博纳艾杰尔产品应用案例
液相色谱图
讨论
1) 对比了cleanert pcx 不同规格小柱150 mg/6 ml与60 mg/3 ml对目标物的吸附情况，发现使用cleanert pcx 60 mg/3 ml，可以满足实验要求；
2) 对比了洗脱溶剂不同强度5%氨水甲醇溶液与10%氨水甲醇溶液对实验的影响，发现在用10%氨水甲醇溶液作为洗脱溶剂时，苯佐卡因受影响较大；用5%氨水甲醇溶液作为洗脱溶剂，对目标物影响均较小，且满足实验要求；
3) 考察了7种局麻药在碱性和中性条件下的稳定性，局麻药混标溶液在5%氨水甲醇溶液放置1 h后，40℃氮气吹干，检测发现除苯佐卡因外，其他物质回收率均在80%以上，局麻药混标溶液在5%氨水溶液中用甲酸调节ph至中性后，普鲁卡因胺和氯普鲁卡因回收率为0%，苯佐卡因回收率只有40%；说明7种局麻药在5%氨水甲醇溶液碱性条件下较稳定。
4) 本文选择了精油和霜基质做7种局麻药加标实验，精油类样品除苯佐卡因外，其他回收率均在90%以上；霜类样品除苯佐卡因外，其他回收率均在70%以上；rsd值小于15%。
结论
本实验建立了7种局麻药的高效液相色谱检测方法，并结合固相萃取技术对化妆品中7种局麻药的含量进行了测定。对于加标量为10 μg/g的样品进行了检测，除苯佐卡因外其他回收率在70% ~ 120%之间，固相萃取方法稳定并且色谱柱检测重现性良好，说明本方法能够用于检测化妆中7种局麻药。
订货信息
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
cleanert pcx | 60 mg/3 ml | 50支/盒 | cx0603 |
venusil xbp c18(l) | 5 μm，150 å，4.6 × 250mm | 1支 | vx952505-l |
直联式保护柱套 | 适用于4.6 ×10 mm和2.1 × 10mm | 1支 | sh-100 |
venusil xbp c18(l)直联式保护柱芯 | 5 μm，150 å；4.6 × 10 mm | 4支/包 | vx950105-ls |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.45 μm | 200个/包 | as021345 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
乙腈 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4 × 4 l/箱 | ah015-4 |
甲醇 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4 × 4 l/箱 | ah230-4 |
qdaura®卓睿全自动固相萃取仪 | 4 通道 24 位 | 1 台 | spe-40 |
15位氮吹仪 | 15位 | 1 台 | nv15-m |
应用编号：af10050
