对羟基苯甲酸甲酯，又称尼泊金甲酯，英文名称methyl 4-hydroxybenzoate，主要用作有机合成、食品、化妆品、医药的杀菌防腐剂，也用作于饲料防腐剂。有资料显示，如果长期大量食用对羟基苯甲酸甲酯，可能会造成肠胃不适，皮肤、黏膜发炎和产生女性荷尔蒙。对羟基苯甲酸乙酯，中文别名：尼泊金乙酯;羟苯乙酯;4-羟基苯甲酸乙酯，英文名称ethyl 4-hydroxybenzoate；常用作食品、化妆品的防腐剂，也用于制药、皮革等行业；对真菌的抑菌效果较强，但对细菌的抑菌效果较弱。用作抑菌防腐剂。
本实验使用venusil® xbp c18 (l)液相色谱柱，测试市售化妆品中对羟基苯甲酸酯类成分，主要测试对象为对羟基苯甲酸甲酯与对羟基苯甲酸乙酯。
表1.对羟基苯甲酸酯类样品信息
样品名称 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas编号 |
对羟基苯甲酸甲酯 | c8h7o3 | 151.14 | ||
对羟基苯甲酸乙酯 | c9h10o3 | 166.17 |
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
agilent 1260 高效液相色谱系统，紫外检测器
试剂材料
甲醇、乙腈、十二烷基二甲基溴化铵均为色谱纯；磷酸二氢钠为分析纯；实验用水为超纯水；
防腐剂储备液（0.5 mg/ml）：准确称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯标准品5 mg，置于10 ml 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，备用；
一次性无菌注射器；尼龙针式过滤器(0.45 μm，直径13 mm)；
样品制备
准确称取试样1 g 置于50 ml 离心管中，加甲醇10 ml，涡旋混匀，超声提取15 min，离心。上清液经0.45 μm 滤膜过滤，取续滤液作为样品试液。
液相色谱条件
色谱柱：venusil® xbp c18 (l)，5 μm，150 å，4.6 × 250 mm；
流动相：0.05 mol/l磷酸二氢钠(含0.002 mol十六烷基三甲基溴化铵，磷酸调节ph至3.5) ︰甲醇︰乙腈=50︰30︰15 (v/v/v)；
波 长：254 nm；
柱 温：25℃；
流 速：1.5 ml/min
进样量：5 μl。
结果与讨论
线性关系和检出限
量取对羟基苯甲酸酯类标准储备液，分别用甲醇稀释至50 μg/ml、40 μg/ml、30 μg/ml、20 μg/ml 和10 μg/ml 的标准溶液，按照上述检测条件依次进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合标准曲线方程，结果见表2：
表 2. 对羟基苯甲酸酯类物质标准曲线和检出限
化合物名称 | 标准曲线方程 | 相关系数 | 检出限(μg/ml，s/n = 3) |
对羟基苯甲酸甲酯 | y = 22.06x 6.4 | 0.9995 | 0.0010 |
对羟基苯甲酸乙酯 | y = 19.63x 4.7 | 0.9994 | 0.0025 |
稳定性测试
表 3. 保留时间稳定性测试结果(n=5)
化合物名称 | 保留时间rsd/% | 峰面积rsd/% |
对羟基邻苯二甲酸甲酯 | 0.5 | 0.4 |
对羟基邻苯二甲酸乙酯 | 0.7 | 0.3 |
市售化妆品检测
表4. 市售化妆品测试结果
样品名称 | 对羟基苯甲酸甲酯（μg /g） | 对羟基苯甲酸乙酯（μg /g） |
某品牌护手霜 | 225 | 158 |
某品牌洗面奶 | 651 | — |
由图3 - 5 可看出，venusil® xbp c18 (l)色谱柱能够将化妆品中两种苯甲酸酯类物质较好的分离开，满足检测要求。
结论
本实验采用高效液相色谱(hplc)法建立了化妆品中对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸乙酯的检测方法。样品中两种待测物采用甲醇提取，venusil® xbp c18 (l)色谱柱(5 μm，150 å，4.6 × 250 mm) 分离，结果表明，本方法对化妆品中对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯的最低检出浓度分别为0.0010 μg/ml和0.0025 μg/ml，能够满足检测要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil® xbp c18 (l) | 5 μm，150 å，4.6 × 250 mm | 1支 | vx952505-l |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器(nylon) | 单膜，13 mm，0.45 μm | 200个/pk | as021345 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/pk | lzsq-2ml |
甲醇 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4 × 4 l/箱 | ah230-4 |
应用编号：af10108