双酚a又称双酚基丙烷(bpa)，在工业上双酚a被用来合成聚碳酸酯(pc)和环氧树脂等材料。双酚a可以通过包装材料进入食品或化妆品中，由于具有强烈的亲脂性，其化学结构与动物及人类的雌性激素类似，进入动物及人体内会造成人类和动物的内分泌系统、免疫系统、神经系统出现异常，还会严重干扰人类和动物的生殖遗传功能。研究已经证实，低剂量的bpa(10-7 mol/l)即能引起支持细胞和精子细胞死亡。我国《化妆品卫生标准》和《化妆品卫生规范》均明确规定，双酚a为化妆品组分中的禁用物质。
本实验使用durashell c18色谱柱，采用lc-ms/ms法检测市售化妆品中双酚a。
表1. 双酚a样品信息
样品名称 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas编号 |
双酚a | c15h16o2 | 228.29 | 80-05-7 |
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
ab sciex api 4000 液相质谱联用仪
试剂材料
甲醇、氨水为色谱纯；实验用水为超纯水；0.1% 氨水：量取1 l水于1 l锥形瓶中，加入1 ml氨水，摇匀，备用；
0.1%氨化甲醇：量取1 l甲醇于1 l锥形瓶中，加入1 ml氨水，摇匀，备用；
双酚a标准储备溶液(1 mg/ml)：准确称取双酚a对照品10 mg置于10 ml容量瓶中，甲醇溶解并定容至刻度，即得浓度为1 mg/ml的双酚a标准储备液；
双酚a标准工作液：用甲醇将双酚a标准储备液稀释至0.05 mg/l，备用；
一次性无菌注射器；尼龙针式过滤器(0.22 μm，直径13 mm) 。
样品制备
准确称取1.0 g试样，置于25 ml比色管中，加入0.1%氨化甲醇并定容至10 ml，涡旋混匀，超声提取30 min，4500 rpm离心5 min，取上清液经0.22 μm尼龙针式过滤器过滤后，滤液作为待测液备用。
色谱条件
液相条件
色谱柱：durashell c18，5 μm，100 å，2.1 × 150 mm；
流动相：a相-0.1%氨水溶液，b相-甲醇；
柱 温：40℃；
流 速：0.2 ml/min；
进样量：2 μl；
梯度洗脱：见表2
表2. 液相色谱梯度洗脱条件
时间/min | 溶液a/% | 溶液b/% |
0 | 50 | 50 |
5 | 40 | 60 |
7 | 30 | 70 |
8 | 0 | 100 |
13 | 0 | 100 |
14 | 50 | 50 |
质谱条件
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：负离子扫描；
电喷雾电压：-5500 v；
雾化气压力：55 psi；
气帘气压力：20 psi；
辅助气压力：60 psi；
离子源温度：330℃；
采集方式：多反应监测(mrm)；
q1、q3均为单位分辨率；
定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞电压见表3
表3. 双酚a质谱检测条件
化合物 | 监测离子对 | dp | ep | ce | cxp |
双酚a | 227.1/211.7 | -80 | -10 | -24 | -13 |
227.1/132.8 | -85 | -10 | -24 | -13 |
结果与讨论
线性关系和检出限量取双酚a标准储备液，分别用甲醇稀释至0.005 μg/ml 、0.01 μg/ml、0.05 μg/ml、0.1 μg/ml、0.5 μg/ml和1.0 μg/ml的系列浓度标准溶液，按照上述检测条件依次进样检测：
表4. 双酚a方法的检出限及稳定性（n=6）
物质名称 | loq/(µg/ml，s/n = 10) | rsd/% | 保留时间/min |
双酚a | 0.01 | 0.93 | 4.70 |
市售化妆品检测
由图1 - 2可看出，durashell c18色谱柱对化妆品中的双酚a有较好的保留，且保留时间稳定，能够满足检测要求。
结论
本实验采用液相色谱-串联质谱(lc-ms/ms)法建立了化妆品中双酚a的检测方法。样品中的双酚a采用0.1%氨化甲醇提取，durashell c18色谱柱(5 μm，100 å，2.1 × 150 mm) 分离，0.1%氨水溶液和甲醇作为流动相进行梯度洗脱。结果表明，本方法最低定量限为0.01 μg/g，能够满足检测要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
durashell c18 | 5 μm，100 å，2.1 × 150 mm | 1支 | dc951502-0 |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器(nylon) | 单膜，13 mm，0.22 μm | 200个/pk | as021320 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/pk | lzsq-2ml |
甲醇 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4 × 4 l/箱 | ah230-4 |
应用编号：af10109
