人工合成着色剂又称人工合成色素，常以苯、甲苯等为原料，先制备色素中间体，再将一种或两种中间体进行磺化、偶合、缩合和偶氮化等化学反应而制成。着色剂的添加使用在现代饲料工业和现代畜牧水产养殖业中日益普遍。通过着色剂改变饲料的色泽。特别是在日益增加使用非传统饲料原料的情况下，添加着色剂以便掩盖某些非传统饲料原料（如菜籽饼粕等）的不良颜色，迎合用户心理习惯，增加市场竞争力；同时，也起到刺激食欲和诱食的作用；还可以通过着色剂改善畜、禽、水产品的色泽，提高其商品价值。如添加着色剂使肉鸡皮肤、禽蛋卵黄、牛奶的黄油以及鱼虾等水产品的肉质具有更鲜艳、美观的色泽和更优良的产品质量，迎合消费者的心理。生产企业违禁添加着色剂，长期食用此类产品将严重危害人体健康。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
agilent 1260高效液相色谱仪；
博纳艾杰尔12位负压spe装置。
试剂材料
甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水；乙酸铵、氨水、甲酸均为分析纯；
八种着色剂混合标准品（纯度99%）；
2%氨化甲醇溶液：量取氨水2 ml，加甲醇溶解并稀释至100 ml，摇匀；
0.02 mol/l乙酸铵溶液：称取乙酸铵1.54 g，用水溶解并稀释至1000 ml。
一次性无菌注射器；针式过滤器(0.45 μm，直径13 mm)；
cleanert pwax固相萃取柱：150 mg/6 ml。
样品制备
样品提取
称取2 g茶叶放入50 ml离心管中，加入10 ml 60℃水，浸泡1小时后，超声提取15 min，10000 r/min离心10 min，取上清液转移到新的离心管中，重复提取一次，合并两次提取液，待净化。
样品净化
先将cleanert pwax (150 mg/6 ml)小柱依次用6 ml甲醇，6 ml水活化平衡；然后将待净化液过柱；用6 ml水（ph为4.0）、6 ml甲醇/甲酸（6︰4，v/v）和6 ml水（ph为7.0）洗柱，弃去全部流出液，小柱用真空泵抽干；最后用6 ml 2%氨化甲醇洗脱。收集洗脱液于40℃氮气吹干，用1 ml水溶解残留物，过0.45 μm ptfe亲水滤膜后待测。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil xbp c18(l)，5 μm，150 å，4.6 × 150 mm
流动相：a相-0.02 mol/l乙酸铵溶液，b相-甲醇
柱 温：30℃
进样量：20 μl
梯度洗脱：见表1
表1. 液相色谱梯度洗脱条件
时间/min | 流速/(ml/min) | a/% | b/% |
0 | 1 | 95 | 5 |
10 | 1 | 80 | 20 |
18 | 1 | 40 | 60 |
25 | 1 | 40 | 60 |
25.01 | 1 | 95 | 5 |
40 | 1 | 95 | 5 |
结果与讨论
实验结果
由表2可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测八种着色剂加标回收率在75% ~ 115%之间，能够满足标准要求。
表2.八种着色剂加标回收实验结果
物质名称 | 波长/nm | 添加水平/mg/kg | 平均回收率/% | cv/% |
柠檬黄 | 428 | 0.05 | 111.1 | 8.1 |
（lemon yellow） | ||||
苋菜红 | 521 | 0.05 | 79.8 | 5.5 |
（amaranth） | ||||
胭脂红 | 509 | 0.05 | 95.8 | 9.0 |
（carminum） | ||||
靛蓝 | 600 | 0.25 | 86.4 | 4.5 |
（indigo） | ||||
日落黄 | 483 | 0.05 | 112.2 | 5.2 |
（sun set yellow） | ||||
诱惑红 | 507 | 0.05 | 96.0 | 6.2 |
（temptation red） | ||||
亮蓝 | 600 | 0.05 | 100.8 | 0.8 |
（light blue） | ||||
酸性红 | 510 | 0.05 | 88.8 | 1.0 |
（carmosine） |
结论
本实验建立了茶叶中八种着色剂残留量检测的实验方法，并结合高效液相色谱对茶叶中八种着色剂残留物的含量进行了测定。对于加标量为0.25 mg/kg的靛蓝、0.05 mg/kg的柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝和酸性红样品，回收率在75% ~ 115%之间，符合要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil xbp c18(l) | 5 μm，150 å，4.6 × 150 mm | 1支 | vx951505-l |
cleanert®pwax | 150 mg/6 ml | 30支/pk | wa1506 |
保护柱套 | 适用于4.6 × 10 mm和2.1 × 10 mm | 1支 | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 5 µm，150 å；4.6 × 10 mm | 4支/包 | va950105-ls |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器(ptfe亲水) | 单膜，13 mm，0.45 μm | 200个/包 | as081345 |
氮吹仪 | 15位 | 1台 | nv15-m |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
卓睿全自动固相萃取仪 | 4通道，24位 | 1台 | spe-40 |
应用编号：af10122
