人工合成着色剂又称人工合成色素，常以苯、甲苯等为原料，先制备色素中间体，再将一种或两种中间体进行磺化、偶合、缩合和偶氮化等化学反应而制成。着色剂的添加使用在现代饲料工业和现代畜牧水产养殖业中日益普遍。通过着色剂改变饲料的色泽，特别是在日益增加使用非传统饲料原料的情况下，添加着色剂以便掩盖某些非传统饲料原料（如菜籽饼粕等）的不良颜色，迎合用户心理习惯，增加市场竞争力；同时，也起到刺激食欲和诱食的作用；还可以通过着色剂改善畜、禽、水产品的色泽，提高其商品价值。如添加着色剂使肉鸡皮肤、禽蛋卵黄、牛奶的黄油以及鱼虾等水产品的肉质具有更鲜艳、美观的色泽和更优良的产品质量，迎合消费者的心理。生产企业违禁添加着色剂，长期食用此类产品将严重危害人体健康。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
agilent 1100高效液相色谱仪；
博纳艾杰尔12位负压spe装置。
试剂材料
甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水；乙酸铵、氨水均为分析纯；
八种着色剂混合标准品（纯度99%）；
2%氨化甲醇溶液：量取氨水2 ml，加甲醇溶解并稀释至100 ml，摇匀；
0.02 mol/l乙酸铵溶液：称取乙酸铵1.54 g，用水溶解并稀释至1000 ml。
一次性无菌注射器；ptfe针式过滤器(0.45 μm，直径13 mm)；
cleanert® pwax固相萃取柱：200 mg/3 ml。
样品制备
样品提取
称取10 g样品放入100 ml烧杯中，超声去除二氧化碳。
样品净化
先将cleanert® pwax (200 mg/3 ml)小柱分别用6 ml甲醇，6 ml水溶液活化平衡；然后将待净化液过柱；用6 ml水和6 ml甲醇洗柱，弃去全部流出液，小柱用真空泵抽干；最后用6 ml 2%氨化甲醇洗脱。收集洗脱液于40℃下氮气吹干，用1 ml水溶解残留物，过0.45 μm亲水滤膜后待测。
注：上述操作步骤可在qdaura®卓睿全自动固相萃取仪上完成。
色谱条件
色谱柱：venusil® xbp c18 (l)，5 μm，150 å，4.6 × 150 mm；
流动相：a相-0.02 mol/l乙酸铵溶液，b相-甲醇；
柱 温：30℃；
进样量：20 μl；
流 速：1 ml/min；
梯度洗脱：见表1
表1. 液相色谱梯度洗脱条件
时间/min | a/% | b/% |
0 | 95 | 5 |
10 | 80 | 20 |
18 | 40 | 60 |
25 | 40 | 60 |
25.01 | 95 | 5 |
40 | 95 | 5 |
表2.液相色谱检测波长梯度条件
波长梯度1 | 波长梯度2 | ||
时间 | 波长/nm | 时间 | 波长/nm |
0 | 428 | 0 | 521 |
10 | 428 | 10 | 521 |
10.01 | 509 | 10.01 | 483 |
15 | 509 | 16 | 483 |
15.01 | 507 | 16.01 | 600 |
17.5 | 507 | 21 | 600 |
17.51 | 510 | 21.01 | 529 |
21 | 510 | 30 | 529 |
21.01 | 529 | 30.01 | 521 |
30 | 529 | 40 | 521 |
30.01 | 428 | ||
40 | 428 | ||
注：波长梯度1适用于柠檬黄、胭脂红、诱惑红、酸性红、赤藓红；波长梯度2适用于苋菜红、日落黄、亮蓝和赤藓红。
结果与讨论
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测八种着色剂加标回收率在60% ~ 110%之间，能够满足标准要求。
表3. 八种着色剂加标回收实验结果(n=3)
物质名称 | 添加水平/(mg/kg) | 平均回收率 /% | rsd /% |
柠檬黄 （lemon yellow） | 0.01 | 92.7 | 3.2 |
胭脂红 （carminum） | 92.6 | 9.2 | |
诱惑红 （the temptation of red） | 91.1 | 4.9 | |
酸性红 （carmosine） | 92.3 | 2.1 | |
赤藓红 （erythrosine） | 69.6 | 9.1 | |
苋菜红 （） | 83.6 | 7.9 | |
日落黄 （） | 83.7 | 3.1 | |
亮蓝 （ ） | 102.8 | 6.7 | |
柠檬黄 （lemon yellow） | 0.05 | 94.8 | 1.5 |
胭脂红 （carminum） | 99.3 | 4.4 | |
诱惑红 （the temptation of red） | 97.8 | 9.0 | |
酸性红 （carmosine） | 91.9 | 2.8 | |
赤藓红 （erythrosine） | 83.1 | 1.4 | |
苋菜红 （） | 99.2 | 6.8 | |
日落黄 （） | 90.7 | 3.5 | |
亮蓝 （ ） | 101.5 | 5.7 |
结论
本实验重现食品中八种着色剂的残留量检测的实验，并结合高效液相色谱对可口可乐中八种着色剂残留物的含量进行了测定。对于加标量为0.01 mg/kg、0.05 mg/kg的样品进行了检测，回收率在60% ~ 110%之间，符合要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil® xbp c18 (l) | 5 μm，150 å，4.6 × 150 mm | 1支 | vx951505-l |
cleanert® pwax | 200 mg/3 ml | 50支/pk | wa2003 |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
氮吹仪 | 15位 | 1台 | nv15-m |
qdaura®卓睿全自动固相萃取仪 | 24位，四通道 | 1台 | spe-40 |
固相萃取真空装置 | 12位 | 1台 | vm12 |
针式过滤器(ptfe) | 单膜，13 mm，0.45 μm | 200个/包 | as081345 |
微孔滤膜 | 50 mm，0.45μm | 200片/盒 | am021345 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
甲醇 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4×4 l/箱 | ah230-4 |
应用编号：af10111
