前言
纽甜是一种新型的二肽类功能性甜味剂，是阿斯巴甜的衍生物，甜味纯正，甜度高，约是蔗糖甜度的8000倍。纽甜属于高效甜味剂，且具有无苦味及其他后味、低热量、相对稳定等特点。我国卫生部在2003年批准纽甜作为新的食品添加剂品种。国家标准gb 2760-2014“食品安全国家标准 食品添加剂使用标准”规定了纽甜在各类食品中的最大允许添加量，较国家标准gb 2760-2011中纽甜在各类食品中按生产需要添加更加严格。
图1. 纽甜的结构式
因此通过有效的实验技术手段，对食品中的纽甜进行监控，以确保消费者对食品消费的安全具有重要意义。
本实验通过优化前处理方法和色谱分离条件建立了纽甜在酸奶中的高效液相色谱法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪、紫外检测器；博纳艾杰尔12位固相萃取真空装置。
试剂材料
某品牌酸奶；
一次性无菌注射器；针式过滤器(0.45 µm，直径13 mm)；
cleanert® s c18固相萃取柱：500 mg/6 ml；
cleanert® s c18-n固相萃取柱：500 mg/6 ml；
高效液相色谱柱：venusil® xbp c18(l)；5 µm，150å，4.6 × 250mm；
混合提取液：分别吸取0.8 ml甲酸和2.5 ml三乙胺，加水稀释至1000 ml；
离子对试剂缓冲液：称取2.0 g辛烷磺酸钠，加适量水溶解，加入1.0 ml磷酸，加水稀释至1000 ml；
纽甜标准储备液：精密称取10 mg纽甜对照品，加混合提取液溶解并稀释至10 ml，制成每1.0 ml中含纽甜1.0 mg的溶液；
纽甜标准测定液：吸取纽甜标准储备液50 µl于5 ml容量瓶中，加2 ml甲醇，用混合提取液定容至刻度。
样品制备
样品提取
准确称取2.0 g酸奶于50 ml具塞塑料离心管中，加入10 ml混合提取液，涡旋震荡5 min，超声15 min后，以6000 r/min离心10 min后，再次加入10 ml混合提取液进行重复上述提取过程，合并提取液并加入20%乙酸锌、10%亚铁氰化钾各200μl，超声10min后，以8000 r/min离心10 min，取上清液，待上样。
样品净化
cleanert® s c18和cleanert® s c18-n固相萃取柱依次用5 ml甲醇、10 ml水活化平衡；将上样液过固相萃取柱，用5 ml混合提取液淋洗，弃去淋洗液，最后以5 ml甲醇洗脱，收集洗脱液。将洗脱液在40℃氮气吹至近2 ml，用混合提取液定容至5 ml，混匀，过滤，待检测。
注：上样液、洗脱液以1 ml/min-2 ml/min的流速通过固相萃取柱
色谱条件
色谱柱：venusil xbp c18(l)；5 µm，150å，4.6 × 250mm；
流动相：离子对试剂缓冲液︰乙腈=60︰40(v/v)；
流速：1.0 ml/min；
检测波长：218nm；
柱温：30℃；
进样量：50 µl。
结果与讨论
实验结果
由表1可知，采用固相萃取法净化结合高效液相色谱法，外标法定量，经两款不同固相萃取柱净化，纽甜的加标回收率均在80% ~ 100%之间，满足检测要求。
表1.纽甜加标回收实验结果(n=3)
固相萃取柱 | 物质名称 | 添加水平（mg/kg） | 平均回收率（%） | rsd（%） |
cleanert® s c18 | 纽甜 | 25 | 92.75 | 2.9 |
cleanert® s c18-n | 纽甜 | 25 | 88.58 | 6.2 |
实验谱图
图1. 10 µg/ml纽甜标准测定液液相色谱图
图2. cleanert® s c18空白样品高效液相色谱图
图3. cleanert® s c18样品加标高效液相色谱图
图4. cleanert® s c18-n空白样品高效液相色谱图
图5. cleanert® s c18-n样品加标高效液相色谱图
结论
本实验依据《食品中纽甜的测定方法》（gb 5009.247-2016）建立了食品中纽甜的检测方法，并用外标法结合液相色谱法对酸奶中纽甜含量进行了测定。当纽甜的加标量为25 mg/kg时，cleanert® s c18、cleanert® s c18-n两款固相萃取柱的回收率均在80% ~ 100%之间，符合要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil® xbp c18(l) | 5 µm，150å ，4.6 × 250 mm | 1支 | vx952505-l |
cleanert® s c18-spe | 500 mg/6 ml | 30支/包 | s185006 |
cleanert® s c18-n-spe | 500 mg/6 ml | 30支/包 | s185006-n |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.45 μm | 200个/包 | as021345-t |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
15位氮吹仪 | 15位 | 1 台 | nv15-m |
固相萃取真空装置 | 12位 | 1台 | vm12 |
