氟苯达唑、噻苯达唑属于苯并咪唑类驱虫药,对牛、羊的肝片吸虫、大片形吸虫及前后盘吸虫均有良好的杀灭效果,且毒性较小。已开始广泛应用于畜牧业养殖中。噻苯达唑对大部分胃肠道蠕虫，尤其是成虫及特定的幼虫有很好地驱虫效果；氟苯达唑属于抗蠕虫药，具有广谱、高效等特点。但是，氟苯达唑和噻苯达唑的广泛使用会对人类身体健康造成危害，所以要对氟苯达唑和噻苯达唑残留量进行检测，以确保人类对动物性食品消费的安全。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
agilent 1100高效液相色谱仪；
博纳艾杰尔12位负压spe装置；
博纳艾杰尔卓睿全自动固相萃取仪。
试剂材料
甲醇、乙腈、异辛烷、正丙醇、乙醇均为色谱纯；实验用水为超纯水；乙酸铵、碳酸钠、氨水、甲酸、盐酸均为分析纯；
噻苯达唑、氟苯达唑及其标示残留物混合标准品（纯度99%）；
0.1 mol/l盐酸溶液：量取浓盐酸0.9 ml，加水溶解并稀释至100 ml，混匀；
30%酸化乙醇溶液：量取0.1 mol/l盐酸溶液30 ml，用乙醇溶解并稀释至100 ml，混匀；
2%碳酸钠溶液：称取碳酸钠2 g，加水溶解并稀释至100 ml，混匀；
2%甲酸水溶液：量取甲酸2 ml，加水溶解并稀释至100 ml，摇匀；
5%氨化甲醇溶液：量取氨水5 ml，加甲醇溶解并稀释至100 ml，摇匀；
0.02 mol/l乙酸铵溶液：称取乙酸铵1.54 g，用水溶解并稀释至1000 ml。
一次性无菌注射器；针式过滤器(0.45 µm，直径13 mm)；
cleanert pcx固相萃取柱：60 mg/3 ml。
样品制备
样品提取
猪肉、鸡肉、羊肾：称取2 g均质好的样品，置于50 ml离心管中，加入0.5 ml 2%碳酸钠水溶液，8 ml乙腈，5 ml异辛烷，涡旋1 min，超声提取10 min，5000 rpm离心5 min，取下层清液置于100 ml鸡心瓶中，剩余残渣加入0.5 ml 2%碳酸钠水溶液，8 ml乙腈重复提取一次，合并两次下层清液，加5 ml正丙醇，50℃旋蒸至干，用8 ml 30%酸化乙醇溶解，作为待净化液。
牛奶：称取2 g样品，置于50 ml离心管中，加入0.5 ml 2%碳酸钠水溶液，8 ml乙腈，10 ml异辛烷，涡旋1 min，超声提取10 min，8000 rpm离心5 min，取下层清液置于100 ml鸡心瓶中，剩余残渣加入0.5 ml 2%碳酸钠水溶液，8 ml乙腈重复提取一次，合并两次下层清液，50℃旋蒸至干，加5 ml正丙醇，用8 ml 30%酸化乙醇溶解，作为待净化液。
样品净化
先将cleanert pcx (60 mg/3 ml)小柱依次用3 ml甲醇，3 ml 2%甲酸水溶液活化平衡；然后将待净化液过柱；用3 ml 2%甲酸水溶液和3 ml甲醇洗柱，弃去全部流出液，小柱用真空泵抽干；最后用3 ml 5%氨化甲醇洗脱。收集洗脱液于50℃氮气吹干，用1 ml流动相（0.02 mol/l乙酸铵溶液︰乙腈 = 80︰20，v/v）溶解残留物，过0.45 µm尼龙针式过滤器后待测。其中猪肉、鸡肉加标实验用博纳艾杰尔卓睿全自动固相萃取仪操作，羊肾、牛奶加标实验用12位负压spe装置手动操作。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil mp c18，5 µm，100 å，4.6 × 250 mm
流动相：a相-0.02 mol/l乙酸铵溶液，b相-乙腈
柱 温：40℃
进样量：20 µl
梯度洗脱：见表1
表1. 液相色谱梯度洗脱条件
结果与讨论
实验结果
由表2可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测噻苯达唑、氟苯达唑加标回收率在60% ~ 110%之间，能够满足标准要求。
表2. 噻苯达唑、氟苯达唑及其标示残留物加标回收实验结果(n=3)
结论
本实验重现动物性食品中氟苯达唑、噻苯达唑及标示残留物的残留量检测的农业部标准，并结合高效液相色谱对4种基质中氟苯达唑、噻苯达唑及其标示残留物的含量进行了测定。对于加标量为0.02 mg/kg、0.1 mg/kg的样品进行了检测，回收率在60% ~ 110%之间，符合国标要求。
应用编号：af10070
