三氯苯唑是兽医临床常用的一种针对肝片吸虫病的特效驱虫药。由于毒副作用、耐药性的产生以及药物滥用，使得农业部、欧盟和fao/who对三氯苯唑的使用和最高残留限量做出了详细的规定。农业部235号文件规定了牛、羊组织脂肪组织作为残留残留监控的靶组织之一，残留标志物为三氯苯唑和三氯苯唑酮的代谢物，最高残留限量为100 µg/kg。
近年来由于动物性食品中的兽药残留问题越来越受到关注，三氯苯唑在牛羊组织中的检测方法也屡见报道。但是，目前还没有牛羊脂肪组织的相关检测方法的报道。
因此通过有效的实验技术手段，对动物性食品中的有关药物残留进行监控，以确保消费者对动物性食品消费的安全具有重要意义。
本实验以之前三氯苯唑在牛羊动物组织中的检测方法为基础，通过优化前处理方法建立了同时确证定量检测三氯苯唑和三氯苯唑酮两种药物在牛羊脂肪组织的高效液相色谱方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪（配紫外检测器）
试剂材料
甲醇、异辛烷、乙腈、正丙醇、无水乙醇均为色谱纯；实验用水为超纯水；无水硫酸钠、乙酸铵均为分析纯；
三氯苯唑酮标准品（纯度99%）；
0.1 mol/l盐酸溶液：取盐酸0.9 ml，加水溶解并稀释至100 ml；
0.02 mol/l乙酸铵溶液：取乙酸铵1.54 g，用水溶解并稀释至1000 ml；
30%酸化乙醇溶液：量取0.1 mol/l盐酸溶液30 ml，用乙醇溶解并稀释至100 ml；
5%氨化甲醇溶液：量取氨水5 ml，用甲醇溶解并稀释至100 ml，混匀。
一次性无菌注射器；针式过滤器(0.45 µm，直径13 mm)；
cleanert pcx/silica固相萃取柱：200 mg/3 ml
样品制备
样品提取
称取2.0 g试料，置于50 ml离心管中，加无水硫酸钠4 ~ 5 g，乙腈5 ml，异辛烷10 ml，涡旋混匀，中速震荡5 min，8000 r/min离心5 min，下层清液转入25 ml鸡心瓶中，残渣再用乙腈5 ml，提取一遍，合并两次提取液，加正丙醇5 ml，于55℃水浴下旋转蒸发至干。加30%酸化乙醇、4 ml、水4 ml溶解，作为待净化液。
样品净化
先将cleanert pcx/silica (200 mg/3 ml)小柱依次用3 ml甲醇，3 ml水，活化平衡；然后将待净化液过柱；用3 ml水淋洗小柱，弃去全部流出液，小柱挤干；最后用3 ml甲醇.，3 ml 5%氨化甲醇洗脱。收集洗脱液于55℃氮气吹干，用1 ml流动相溶解残留物，过0.45 µm滤膜后，供高效液相色谱仪测定。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil xbp c18（l），5 µm，150 å，4.6 × 250 mm
流动相：0.02 mol/l乙酸铵溶液/乙腈（40︰60）， 使用前经微孔滤膜过滤
柱 温：30℃
进样量：20 µl
结果与讨论
由表3可知，采用固相萃取结合高效液相色谱法检测三氯苯唑酮加标回收率在60% ~ 100%之间，rsd值小于10%，能够满足检测要求。由图1可看出经cleanert pcx/silica固相萃取柱净化，采用venusil xbp c18(l)色谱柱检测得到的三氯苯唑酮峰形良好，且保留时间稳定。
表3. 三氯苯唑酮加标回收实验结果
结论
本实验建立了三氯苯唑及代谢物残留量的高效液相检测方法，并结合固相萃取技术对羊肾中三氯苯唑和三氯苯唑酮的含量进行了测定。对于加标量为0.05 mg/kg的样品进行了检测，回收率在60% ~ 100%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中三氯苯唑及其代谢物的残留量。
应用编号：af10075
