齐帕特罗(zilpaterol)属于β2-肾上腺素受体激动剂，是一种与克伦特罗(俗称瘦肉精)、莱克多巴胺、沙丁胺醇等具有同样生理效应的生长促进剂，属于违禁药物。但其化学结构却与常见的β-兴奋剂不同,其毒性也是莱克多巴胺的15倍。然而，随着相关兽药监管部门对克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等常见β-兴奋剂打击力度的增大和相关检测技术的日趋成熟，齐帕特罗极有可能被不法分子利用，成为食品安全的潜在杀手。sn/t 2624-2010《 动物源性食品中多种碱性药物残留量的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》规定受体激动剂最低检测限为0.5 μg/kg。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
ab sciex api 4000 液相质谱联用仪
试剂材料
甲醇、氨水、乙腈、甲酸均为色谱纯；实验用水为超纯水；柠檬酸为分析纯；
齐帕特罗标准品（纯度大于98%），甲醇溶解并稀释；
柠檬酸缓冲液：称取10.5 g溶解于500 ml水中，用氨水调节ph至2.5；
甲醇-氨水（95/5,v/v）；
水-甲醇（95/5,v/v）；
0.1%甲酸水-甲醇溶液（95/5,v/v）；
一次性无菌注射器；尼龙针式过滤器(0.22 μm，直径13 mm)；
cleanert® pep-2固相萃取柱：60 mg/3ml；
cleanert® pcx固相萃取柱：60 mg/3ml
样品制备
样品提取
准确称取5 g均质猪肉试样于50 ml离心管中，加入30 ml乙腈，2 ml异丙醇和10 ml柠檬酸缓冲液，涡旋混合提取3 min，8000 r/min离心3 min，上清液转移至250 ml梨心瓶中。重复上述提取操作，合并提取液，加入6 ml异丙醇后，在40℃旋蒸浓缩至5 ml左右，转移浓缩液至50 ml离心管中，并用5 ml柠檬酸缓冲液润洗梨心瓶，合并洗液，8000 r/min离心10 min，取清液待净化。
样品净化
取pep-2 (60 mg/3 ml) 和pcx (60 mg/3 ml)，用转接头按从上到下的顺序串联好，依次用3 ml甲醇、3 ml水、3 ml柠檬酸缓冲液活化小柱，待净化液以0.5 ml/min流速全部过柱，再依次用3 ml柠檬酸缓冲液、3 ml水、3 ml水-甲醇(95/5,v/v)淋洗小柱，抽干5 min，最后依次用4 ml甲醇、6 ml甲醇-氨水(95/5,v/v)洗脱小柱，合并收集洗脱液，40℃氮气浓缩至干，加入1.0 ml 0.1%甲酸水-甲醇溶液(95/5,v/v)振荡溶解残渣，过0.22 μm尼龙针筒过滤器，待测。
注：上述操作步骤可在qdaura®卓睿全自动固相萃取仪上完成。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil® mp c18，2.1 × 50mm，3 μm，100 å；
流动相：a相-0.1%甲酸水溶液，b相-0.1%甲酸乙腈；
柱 温：30℃；
进样量：10 µl；
流速：300 µl/min；
等度洗脱：0~10 min，a︰b = 95︰5 (v/v)。
质谱条件
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子扫描；
电喷雾电压：4500 v；
雾化气压力：40 psi；
气帘气压力：15 psi；
辅助气压力：40 psi；
离子源温度：400℃；
采集方式：多反应监测(mrm)；
q1、q3均为单位分辨率；
质谱参数(见表1)
表1. 齐帕特罗的质谱参数
结果与讨论
实验结果
由表2可知，采用固相萃取结合液相色谱-串联质谱法检测齐帕特罗加标回收率在90% ~ 110%之间，rsd值小于14%，能够满足检测要求。由图1和图2可看出经cleanert® pep-2串联cleanert® pcx固相萃取柱净化，采用venusil® mp c18色谱柱检测得到的齐帕特罗峰形良好，且保留时间稳定。
表2. 齐帕特罗加标回收实验结果(n=3)
结论
本实验建立了齐帕特罗残留量的lc-ms/ms检测方法，并结合固相萃取技术对猪肉中齐帕特罗的含量进行了测定。对于加标量为4.0 μg/kg的样品进行了检测，回收率在90% ~ 110%，符合国标要求，固相萃取方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测动物源性食品中齐帕特罗的残留量。
应用编号：af10090
