服用甲砜霉素可发生腹痛、腹泻、恶心、呕吐等消化道反应，其发生率在10%以下；偶见皮疹等过敏反应；早产儿及新生儿中尚未发现有灰婴综合征者。仅有个例报道有出现短暂性皮肤和面色苍白；本品亦可引起造血系统的毒性反应，主要表现为可逆性的红细胞生成抑制；白细胞和血小板减少；发生再生障碍性贫血者罕见。
因此通过有效的实验技术手段，对牛奶中的有关甲砜霉素残留进行监控，以确保消费者对牛奶消费的安全具有重要意义。
本实验通过优化前处理方法建立了甲砜霉素在牛奶中的高效液相色谱的检测方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪（紫外检测器）；
博纳艾杰尔 12 位负压spe 装置。
试剂材料
乙酸乙酯、乙腈、正己烷为色谱纯；实验用水为超纯水；甲砜霉素标准品（纯度99%）；
一次性无菌注射器；ptfe-q 针式过滤器(0.45 μm，直径13 mm)；
cleanert aq c18 固相萃取柱：500 mg/3 ml
cleanert pep 固相萃取柱：200 mg/6 ml。
样品制备
样品提取
称取牛奶 5 g 于50 ml 离心管中，加乙酸乙酯20 ml,振荡10 min，4000 r/min 离心5 min,取上清液于鸡心瓶中，残渣加乙酸乙酯20 ml,重复提取一次，合并两次提取液，于45℃旋蒸至近干，加水5 ml 于鸡心瓶中，超声5 min 充分溶解，转至50 ml 离心管中，再加水5 ml 于鸡心瓶中重复溶解后转至同一离心管中。加20 ml 正己烷，振荡5min，4000 r/min 离心2 min，取下层液待净化。
样品净化
先将小柱分别用 5 ml 乙腈，5 ml 水溶液活化平衡，然后将待净化液过柱，弃去全部流出液并挤干，最后用5 ml 乙腈洗脱。收集洗脱液于45℃氮气吹干，用1 ml 水溶解残留物，过0.45 μm ptfe-q 针式过滤器后待测。
以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil xbp c18 (l)，5 μm，150 å，4.6 × 250 mm
流动相：乙腈︰水=20︰80
柱 温：35℃
进样量：20 μl
检测波长：225 nm
结果与讨论
实验结果
由表1 可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测甲砜霉素，两款小柱加标回收率均在90% 以上，能够满足标准要求，并且cleanert pep 效果更佳。
表 1.牛奶中甲砜霉素加标回收实验结果
净化柱名称 | 添加水平/(mg/kg) | 平均回收率 /% | cv /% |
cleanert aq c18 | 2.0 | 95.7 | 2.6 |
cleanert pep | 2.0 | 97.8 | 1.3 |
结论
本实验依据gb 29689-2013 建立了牛奶中甲砜霉素残留量的检测方法，并结合高效液相色谱对牛奶中甲砜霉素残留物的含量进行了测定。对于加标量为2.0 mg/kg的牛奶样品，回收率在90% ~ 100%之间，两款小柱均符合实验要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil xbp c18 (l) | 5 µm，150 å，4.6 × 250 mm | 1支 | vx952505-l |
cleanert aq c18 | 500 mg/3 ml | 50支/包 | s185003-aq |
cleanert pep | 200 mg/6 ml | 30支/包 | pe2006 |
qdaura® 卓睿全自动固相萃取系统 | 4通道 | 1台 | spe-40 |
15位氮吹仪 | 15位 | 1台 | nv15-m |
保护柱套 | 适用于4.6 × 10 mm和2.1 × 10 mm | 1支 | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 5 µm，150 å；4.6 × 10 mm | 4支/包 | vx950105-ls |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.45 µm | 200个/包 | as081345 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：af10121
