自然界中低聚异麦芽糖极少以游离状态存在,但作为支链淀粉或多糖的组成部分,在某些发酵食品如酱油、黄酒或酶法葡萄糖浆中有少量存在。 工业上以淀粉为原料生产低聚异麦芽糖需要一种酶,此酶为α-葡萄糖苷酶,又名葡萄糖基转移酶,简称α-糖苷酶。它能切开麦芽糖和麦芽低聚糖分子结构中α-1,6 糖苷键,并能将游离出来的一个葡萄糖残基转移到另一个葡萄糖分子或麦芽糖或麦芽三糖等分子中的α-1,6 位上,形成异麦芽糖、异麦芽三糖、异麦芽四糖、异麦芽五糖和潘糖等。
表1. 低聚异麦芽糖样品信息
样品名称 | 英文名 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas编号 |
低聚异麦芽糖 | isomaltooligosaccharide | (c5h10o5)n n=2-10 | 300-2000 | 499-40-1 |
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
cheetah® hp-100 高压制备仪器
试剂材料
去离子水;乙腈为色谱纯;
高效液相色谱柱:hilic 5 μm 100 å 20*250 mm
低聚异麦芽糖样品:客户提供
样品溶解
取200 mg 样品用1 ml 水超生溶解,过0.22 μm 滤膜后上样。
制备条件
色谱柱:hilic 10 μm 100 å 20*250 mm;
流动相:a:去离子水 b:乙腈;
检测器:elsd(载气流量2.5ln/min,漂移管温度60℃)
流速:18 ml/min
进样量:40 mg
梯度:
表2. 液相色谱梯度洗脱条件
时间/min | 流速/(ml/min) | a/% | b/% |
0.0 | 18.0 | 25.0 | 75.0 |
60.0 | 18.0 | 45.0 | 55.0 |
检测条件
色谱柱:hilic 5 μm 100 å 4.6×250 mm;
流动相:a:去离子水 b:乙腈;
检测器:elsd(载气流量2.5ln/min,漂移管温度80℃)
流速:1 ml/min
进样量:20 μl
梯度:
表3. 液相色谱梯度洗脱条件
时间/min | 流速/(ml/min) | a/% | b/% |
0.0 | 1.0 | 25.0 | 75.0 |
50.0 | 1.0 | 50.0 | 50.0 |
结果与讨论
本实验采用hilic (5 μm 100 å 20*250 mm)对低聚异麦芽糖进行了制备,由表2 及图1 可知,流动相为去离子水与乙腈,进行梯度洗脱时,样品通过制备,峰形良好,且与附近杂质分离度较好,所得产物纯度满足客户需求。
图1.制备色谱图(收集12.8min,16.5min,21min 馏分)
图2.12.8min 馏分检测色谱图
图3.16.5min 馏分检测色谱图
图4.21min 馏分检测色谱图
图5.样品检测色谱图
结论
本实验采用hilic (5 μm 100 å 20*250 mm)色谱柱对低聚异麦芽糖进行了制备。结果表明hilic 填料对该样品分离效果良好,所得产物纯度能够满足客户要求。
附:相关产品
产品名称 | 规格 | 包装数量 | 订货号 |
hilic | 10 μm 100 å 20×250 mm | 1支 | vh902520-0 |
hilic | 5 μm 100 å 4.6×250 mm | 1支 | vh952505-0 |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32×11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
液相进样针 | 20 µl,平头 | 1支/盒 | jyz-20ul |
乙腈 | 4 l/瓶,uv级 | 4*4 l/箱 | ah015-4 |
针筒过滤器 | 0.22 μm 13 mm 单膜 | 200个/包 | as011320 |
应用编号:pp10019