法莫替丁主要剂型有片剂、胶囊剂、注射剂等，为第三代组胺h2 受体阻滞药，能够抑制胃酸分泌。适用于胃及十二指肠溃疡、反流性食管炎、上消化道出血、卓-艾综合征等症。
表1. 法莫替丁样品信息
样品名称 | 英文名 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas号 |
法莫替丁 | famotidine |
| c8h15n7o2s3 | 337.45 | 76824-35-6 |
实验部分
试剂与材料
试剂材料
屈臣氏水；甲醇、乙腈、冰醋酸为色谱纯；醋酸钠、磷酸二氢钠、盐酸、氢氧化钠为分析纯；磷酸盐缓冲溶液：取磷酸二氢钠
磷酸盐缓冲溶液：取磷酸二氢钠13.6 g，置900 ml水中，用1mol/l氢氧化钠溶液调节ph值至7.0±0.1，加水至1000 ml，混匀，取930 ml与乙腈70 ml混合，即得；
醋酸钠缓冲液：称取醋酸钠13.6 g，置于900 ml水中，用冰醋酸调节ph值至6.0，加水稀释至1000 ml，混匀；
1.0mol/l氢氧化钠：称取4.0 g氢氧化钠至100 ml容量瓶中，加适量水溶解，并稀释至刻度；
1.0mol/l盐酸：量取100 ml水至300 ml烧杯中，搅拌状态下向烧杯中加入盐酸溶液（12 mol/l）8.5 ml；
法莫替丁：客户提供；
高效液相色谱柱：durashell c18；5 μm，100 å，4.6×250 mm。
样品制备
供试品溶液：取本品适量，加甲醇适量溶解后，用磷酸盐缓冲液稀释制成每1 ml中含法莫替丁0.5 mg的溶液作为供试品溶液；
系统适用性溶液：取法莫替丁约25 mg，加乙腈2 ml、上述磷酸盐缓冲液2 ml使溶解，加0.5 mol/l盐酸溶液3 ml，40℃水浴加热5 min，加1 mol/l盐酸5 ml，用上述磷酸盐缓冲液稀释制成每1 ml中约含0.5 mg/ml的溶液作为系统适用性溶液。
色谱条件
色谱柱：durashell c18；5 μm，100 å，4.6×250 mm；
流动相a：醋酸钠缓冲液︰乙腈=93︰7 (v/v)，流动相b：乙腈，梯度洗脱；
检测波长：270 nm；
柱温：35℃；
流速：1.5 ml/min；
进样量：20 μl。
梯度洗脱
时间/min | 流动相a/% | 流动相b/% |
0 | 100 | 0 |
15 | 100 | 0 |
42 | 52 | 48 |
43 | 100 | 0 |
48 | 100 | 0 |
结果与讨论
本实验采用durashell c18色谱柱对法莫替丁有关物质进行分离，由表2及下图可知，流动相为醋酸盐缓冲溶液及乙腈，梯度洗脱时，待测物峰形良好，且与附近杂质分离较好。
表2. 法莫替丁有关物质测试结果
样品名称 | 化合物名称 | 保留时间/min | 理论塔板数 | 拖尾因子 | 相对保留时间 | 分离度 |
法莫替丁系统适用性溶液 | 杂质i | 7.938 | 12333 | 1.10 | 0.725 | — |
法莫替丁 | 10.948 | 13036 | 1.13 | — | 8.98 | |
杂质ii | 12.810 | 14551 | 1.03 | 1.170 | 4.60 | |
法莫替丁有关物质供试品 | 峰1 | 3.252 | 8815 | 1.148 | 0.297 | — |
峰2 | 5.731 | 10598 | 0.942 | 0.524 | 13.70 | |
峰3 | 7.920 | 11076 | 1.232 | 0.724 | 8.35 | |
法莫替丁 | 10.940 | 12216 | 1.163 | — | 8.65 | |
峰5 | 12.595 | 10717 | 0.984 | 3.74 | 3.74 |
图1. 法莫替丁系统适用性溶液高效液相色谱图(下图为上图的局部放大)
图2. 法莫替丁有关物质供试品溶液高效液相色谱图(下图为上图的局部放大)
结论
本实验依据中国药典（2015年版 二部）检测方法，采用durashell c18色谱柱(5 μm，100 å，4.6×250 mm)对法莫替丁有关物质进行分离。法莫替丁峰保留时间约为10.948 min，杂质i峰和杂质ii峰相对法莫替丁的保留时间约为0.7和1.2，理论塔板数按法莫替丁峰计算为12216，法莫替丁峰与相邻杂质峰的分离度为3.74，可以满足检测要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
durashell c18 | 5 μm,100 å, 4.6×250 mm | 1支 | dc952505-0 |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32×11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
微孔滤膜 | 单膜，13 mm，0.45 μm | 100个/包 | as021345-t |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：ap10138
