背景
二甲基甲酰胺（dmf）是一种良好的两性有机溶剂，职业接触主要经呼吸道和皮肤途径进入人体。dmf进入人体后，经过代谢生成的活性产物会造成机体肝肾细胞dna损伤、姐妹染色体交换或组织器官损伤的改变。
本研究选用dmf在体内的一种名叫3-甲基-5异丙基乙内酰脲(mvh)的代谢产物作为对接触dmf监测的生物标志物，建立了96 孔spe板快速处理血红蛋白中mvh的方法，以结构类似的mih作为内标物，lc-ms/ms作为检测手段，为评估dmf长时间累积接触提供米乐网页的解决方案。
表1 化合物信息
化合物 | 名称 | cas | 分子量 | 结构 |
mih | 3-methy-5-isobutylhydantion | 675854-31-6 | 170.10 |  |
mvh | 3-methyl-5-isopropylhydantoin | 74310-99-9 | 156.18 |  |
材料及仪器
cleanert mas-b 96孔spe板；cleanert m96 生物样品前处理仪；96孔接收板；venusil mp c18（2.1*150mm，5μm，100å）；api4000 lc-ms/ms。
样品处理方法
准确称取0.1g血红蛋白样品，置于15ml离心管中，准确加入mih标准溶液20μg/ml 0.25ml，再加入盐酸-醋酸（2：1，v/v）溶液4.75ml。震荡混匀3min。将样品瓶于沸水浴中加热降解1h （反应过程可能会产生气泡，小心操作），取出冷却至室温，用甲醇：水（1:1,v/v）溶液定容至5ml。混匀后，取200μl溶液，各5份，加至96孔板，各加入600μl 1%甲酸乙腈溶液，用移液枪或混合器将溶液混匀。使用cleanert m96 生物样品前处理仪，控制压力，使样品慢速流出流速约1滴/2s。将净化后的样品转移，待检测。
仪器检测条件
hplc条件
色谱柱：venusil mp c18（2.1*150mm，5μm，100å）
流速：200μl/min；流动相：0.1%甲酸水/乙腈（65/35，v/v）
进样量：2μl；柱温：30℃
质谱条件
扫描模式：电喷雾电离正模式
采集模式：多反应监测（mrm）
表2 质谱参数
化合物 | 保留时间/min | q1 | q3 | dp | ce |
mvh | 2.8 | 157.2 | 129.1 | 61 | 16 |
71.9 | 66 | 23 | |||
55.2 | 65 | 37 | |||
mih | 3.4 | 171.1 | 143.1 | 62 | 18 |
86 | 66 | 22 | |||
69 | 62 | 29 |
结果
图1 标准溶液色谱图（mvh、mih浓度均为250ng/ml）
图2 血红蛋白样品色谱图
图3 样品加标色谱图（加标浓度为50mg/kg）
表3 血红蛋白样品加标回收率
名称 | 加入量（mg•kg-1） | 平均实际量（mg•kg-1） | 平均回收率(n=5) | rsd(n=5) | lod ng.ml-1 |
mvh | 50 | 50.2 | 100.4% | 3.5% | 1 |
结论
实验结果表明采用cleanert mas-b 96孔spe板能够对血红蛋白中的dmf在体内的代谢物3-甲基-5异丙基乙内酰脲(mvh) 进行快速萃取，从而达到检测体内dmf水平的目的。采用lc-ms/ms分析，最低检测限可达到1 ng/ml。
订货信息
产品名称 | 规格/包装 | 订货号 |
cleanert mas-b 96孔板 | 30mg/2ml/well | ms-b-0302w |
cleanert m96 生物样品前处理仪 | 与96孔板匹配 | spe-m96 |
96孔接收板 | 1ml，与96孔板匹配 | 96sp1036 |
venusil mp c18 | 2.1*150mm，5μm，100å | va951502-0 |
乙腈 | lc-ms级, 4*2.5l/箱 | lc015 |
水 | lc-ms级，4*2.5l/箱 | lc365 |
10ml棕色样品瓶 | 100/pk | 1509-1800 |
10ml样品瓶瓶盖 | 100/pk | 1515-1748 |
应用编号：yb10001
