不饱和脂肪酸是构成体内脂肪的一种脂肪酸，人体必需的脂肪酸。花生四烯酸(ａａ)是一种在生物体内含量较高, 分布最广的多不饱和必需脂肪酸。对粪便样品中花生四烯酸的研究，可为体内脂肪酸代谢提供一定参考信息。
本实验采用cleanert mas-m对粪便样品进行净化处理，建立了粪便样品中花生四烯酸含量检测方法。
目标物信息
材料与仪器
cleanert mas-m 96孔萃取板；cleanert m96 生物样品前处理仪；cleanert v96 氮吹浓缩仪；96孔接收板；ptfe过滤头；venusil asb c18（2.1*50mm，3μm，150å）；api 4000 lc-ms/ms串联质谱。
样品处理方法
样品前处理
称取50mg粪便样品加入5ml离心管中，向其中加入0.5ml 1%甲酸水，涡旋混匀2min，再向其中加入1.5ml甲醇，涡旋，6000r/min离心5min，取上清液；重复上述步骤再提取一次，合并上清液，过0.22μm ptfe滤头，向其中加入0.6ml氨水，使上样液中含有4%氨水，待净化。
净化过程
所用spe为cleanert mas-m 96孔萃取板
活化：甲醇600μl，水600μl
上样：待净化液全部上样，上样液弃去
淋洗：水600μl，甲醇600μl，弃去
洗脱：3%甲酸乙腈溶液600μl，使用96孔收集板将洗脱液分别收集。
将收集板放置于96位氮吹仪上，将温度设定为45℃，开启氮气将洗脱液氮吹至近干，并用100μl乙腈/水（7/3，v/v）将样品重溶，进样检测。
仪器检测条件
hplc条件
色谱柱：venusil asb c18（2.1*50mm，3μm，150å）
流速：200μl/min
柱温：30℃
进样量：5μl
流动相：乙腈/水（75/25，v/v）
质谱条件
扫描模式：电喷雾电离负模式
采集模式：多反应监测（mrm）
表1 质谱参数
化合物 | q1 | q3 | dp | ce |
花生四烯酸 | 303.0 | 259.1 | -109 | -18 |
303.0 | 230.9 | -85 | -29 | |
303.0 | 205.1 | -107 | -20 | |
303.0 | 177.1 | -90 | -30 |
图1 花生四烯酸标准溶液色谱图（浓度为5ppm）
图2 粪便样品色谱图
图3 粪便样品加标色谱图（加标浓度为10mg/kg）
实验所用的粪便样品中含有约3mg/kg的花生四烯酸，计算加标回收率时需要扣除样品中目标物的含量。
表2 回收率数据
加标浓度 | 平均加标回收率 | lod |
10mg/kg | 88.9% | 1μg/kg |
结论
本实验采用cleanert mas-m 96孔板对粪便样品中的花生四烯酸进行批量样品高通量前处理。实验结果表明cleanert mas-m能够有效除去干扰物，并能够对花生四烯酸进行定量萃取，回收率达到88.9%，可以满足日常对批量生物样品分析的需求。
订货信息表
产品名称 | 规格/包装 | 订货号 |
cleanert mas-m | 96孔板，50mg/2ml | ms-m-0502w |
ptfe滤头 | 0.22μm，200/pk | as041320 |
cleanert v96 氮吹浓缩仪 | 与96孔板匹配 | nv96-g |
cleanert m96 生物样品前处理仪 | 与96孔板匹配 | spe-m96 |
96孔接收板 | 2ml/well，与96孔板匹配 | 96sp2036-y |
venusil asb c18 | 2.1*50mm，3μm，150å | vs930502-0 |
乙腈 | lc-ms级, 4*2.5l/箱 | lc015 |
水 | lc-ms级，4*2.5l/箱 | lc365 |
甲醇 | hplc, 4*4l | ah230-4 |
1.5ml棕色进样样品瓶 | 100/pk | 1109-0520 |
进样样品瓶瓶盖 | 100/pk | 0915-1819 |
样品瓶内插管 | 100/pk | 0609-0357 |
应用编号：yb10002
