背景
氯吡格雷是一种新型的噻吩并吡嗪类衍生物，具有抗血小板聚集作用及抗血栓形成作用。氯吡格雷口服后即可被人体快速吸收并代谢，其主要代谢产物为氯吡格雷酸，氯吡格雷的活性代谢物为氯吡格雷氧化成含氧化合物之后水解而成的一种硫醇衍生物，该化合物极不稳定，在血浆中很难检测到。
本文通过衍生化方法，并采用cleanert c2 spe柱建立了血浆中氯吡格雷活性代谢物的前处理方法，为氯吡格雷的人体生物等效性研究提供参考方法。
目标物信息
氯吡格雷 | 氯吡格雷活性代谢物 | 氯吡格雷活性代谢物衍生物 |
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材料及仪器
cleanert c2柱（150mg/3ml）；cleanert m08 正压型固相萃取装置；venusil mp c18(2)（2.1*50mm，5μm，110å）；2-溴-3‘-甲氧基苯乙酮(mpb)。
样品处理方法
样品衍生化
采血后立即向每份血样中加入25μl 500 mm溶解于乙腈中的mpb，轻轻混合(静止10 min)，3000rpm离心30 min以分离血浆。将血浆样品保存于-80℃待测。
样品净化
（1）样品预处理：精密吸取血浆400μl，加入550μl 1%蚁酸，涡旋振荡使混匀。
（2）活化：将cleanert c2柱先后用300μl甲醇和300μl纯水进行预处理。
（3）上样：再将血浆混合物上样至处理过的cleanert c2柱上。
（4）淋洗：用500 μl 1%蚁酸和500μl 50 mm醋酸铵水溶液冲洗柱子。
（5）洗脱：先后用150μl甲醇和100μl 50 mm醋酸铵进行洗脱
将洗脱物进行lc-ms/ms分析。
仪器检测条件
hplc条件
色谱柱：venusil mp c18(2)（2.1*50mm，5μm，100a）
流速：200μl/min；流动相：0.1%甲酸水/乙腈（55/45，v/v）
柱温：30℃；进样量：3μl
质谱条件
扫描模式：电喷雾电离正模式
采集模式：多反应监测（mrm）
表2 质谱参数
q1 | q3 | dp | ce |
504 | 212 | 65 | 27 |
504 | 184.1 | 70 | 40 |
504 | 152.1 | 65 | 52 |
结果
对血浆样品进行氯吡格雷活性代谢物加标实验，加标回收率均高于93%，本方法对目标物的loq低至0.5ng/ml。
图1 氯吡格雷标准溶液色谱图（浓度为30ng/ml）
图2血浆色谱图
图3血浆加标色谱图
结论
本方法采用cleanert c2小柱对血浆中氯吡格雷活性代谢物进行萃取分析，样品基质对分析物没有明显干扰，回收率高于93%。该方法适用于血浆中氯吡格雷活性代谢物的日常监测分析。
订货信息表
产品名称 | 规格/包装 | 订货号 |
cleanert c2 | 150mg/3ml | s021503 |
cleanert m08 正压型固相萃取装置 | 8位 | spe-m08 |
氮吹仪 | 24位 | nv24a-ⅱ |
venusil mp c18(2) | 2.1*50mm，5μm，110å | va950502-2 |
甲醇 | hplc, 4*4l | ah230-4 |
乙腈 | lc-ms级, 4*2.5l/箱 | lc015 |
水 | lc-ms级，4*2.5l/箱 | lc365 |
1.5ml棕色进样样品瓶 | 100/pk | 1109-0520 |
进样样品瓶瓶盖 | 100/pk | 0915-1819 |
