前言
核苷酸是生命遗传物质dna和rna的基本组成单位，是体内合成核酸的前身物。婴幼儿正处在快速生长发育阶段，身体对核苷酸的需求量超过体内合成核苷酸的能力，但母乳可为婴幼儿提供所需核苷酸。而对于没有母乳喂养的婴幼儿，食用含足量核苷酸的配方奶粉，不仅可提高免疫力，也可保护婴幼儿肠胃健康。
表1. 5种核苷酸样品信息
样品名称 | 英文简称 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas号 |
胞嘧啶核苷酸 | cmp |  | c9h14n3o8p | 323.2 | 63-37-6 |
次黄嘌呤核苷酸 | imp |  | c10h13n4o8p | 348.21 | 131-99-7 |
腺嘌呤核苷酸 | amp |  | c10h14n5o7p | 347.22 | 61-19-8 |
尿嘧啶核苷酸 | ump |  | c9h13n2o9p | 324.18 | 58-97-9 |
鸟嘌呤核苷酸 | gmp |  | c10h14n5o8p | 363.22 | 85-32-5 |
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪，紫外检测器；
试剂材料
屈臣氏水；甲醇为色谱纯；
磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、冰乙酸、四丁基硫酸氢铵为分析纯；
胞嘧啶核苷酸对照品、腺嘌呤核苷酸对照品、尿嘧啶核苷酸对照品、次黄嘌呤核苷酸对照品、鸟嘌呤核苷酸对照品：由某乳制品公司提供；
高效液相色谱柱：venusil® aq c18 plus； 5 μm，150 å，4.6 × 250 mm；
样品制备
5种核苷酸混合标准溶液：分别称取核苷酸标准品cmp、amp、ump各10 mg、gmp、imp各5 mg(精确至0.1 mg)，用水溶解成并定容至100 ml，混匀，即得；
某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液：称取5.0 g奶粉样品，用20 ml热水(50-60℃)充分溶解试样，冷却至室温；用10%乙酸溶液调节ph至4.1，移至50 ml容量瓶中，定容，滤纸过滤，所得滤液用0.45 μm滤膜过滤，即得供试品溶液。
色谱条件
色谱柱：venusil® aq c18 plus； 5 μm，150 å，4.6 × 250 mm；
流动相：磷酸盐缓冲溶液(称取1.360g磷酸二氢钾，加0.4753 g四丁基硫酸氢铵，加900 ml水溶解，用0.1 mol/l磷酸氢二钾溶液调ph至3.2，定容至1000 ml)︰甲醇=1000︰40(v/v)；
波 长：254 nm；
柱 温：25℃；
流 速：1.0 ml/min；
进样量：10 µl。
结果与讨论
本实验按照gb 5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法，使用venusil® aq c18 plus色谱柱对5种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉供试品溶液进行检测，由以下结果可知，5种核苷酸分离度均大于1.5，实现完全分离；对婴幼儿奶粉样品的分离效果与国标标准图谱接近。
表2.5种核苷酸实验数据
样品名称 | 化合物名称 | 保留时间/min | 理论塔板数 | 分离度 | 拖尾因子 | 备注 |
5种核苷酸混标 | cmp | 4.322 | 13595 | — | 0.91 | 图1 |
ump | 14.615 | 18296 | 35.41 | 0.96 | ||
amp | 17.667 | 16020 | 6.15 | 0.87 | ||
gmp | 19.177 | 17972 | 2.67 | 0.96 | ||
imp | 21.941 | 18790 | 4.55 | 0.98 | ||
某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液 | cmp | 4.302 | 53663 | — | — | 图2、图3 |
ump | 14.589 | 17443 | 39.83 | 1.25 | ||
amp | 17.574 | 17425 | 6.12 | 0.96 | ||
gmp | 19.100 | 18188 | 2.77 | 0.96 | ||
imp | 21.829 | 21145 | 4.67 | 1.10 |
图1.venusil® aq c18 plus色谱柱5种核苷酸混标高效液相色谱图
图2.venusil® aq c18 plus色谱柱婴幼儿奶粉供试品溶液高效液相色谱图
图3.venusil® aq c18 plus色谱柱婴幼儿奶粉供试品溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大图)
结论
本本实验按照gb5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法，使用venusil® aq c18 plus色谱柱对5种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉供试品溶液进行检测，结果表明在上述实验条件下，venusil® aq c18 plus色谱柱可用于婴幼儿奶粉中5种核苷酸的分析检测。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil® aq c18 plus | 5 μm，150å；4.6 × 250mm | 1支 | vap952505-l |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a；1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
微孔滤膜 | 单膜，13 mm，0.45 μm | 100个/包 | as021345-t |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：ap10139
