前言
甜蜜素（sodium cyclamate） 化学名称为环己基氨基磺酸钠，是一种人工合成的甜味剂，味道清甜，为无营养甜味剂。甜蜜素的甜度约为蔗糖的30~40倍，其作为国际通用的食品添加剂中可用于清凉饮料、果汁、冰激凌、糕点及蜜饯等食品中。由于人工合成甜味剂产生的热量少，对肥胖、高血压、糖尿病、龋齿等患者有益，加之又具有高效、经济等优点，因此在食品工业中被广泛应用。但是人工合成甜味剂的安全性已受到了广泛质疑，消费者如果经常食用甜蜜素含量超标的糕点、饮料或其他食品，就会因摄入过量对人体的肝脏和神经系统造成危害，特别是对代谢排毒的能力较弱的老人、孕妇、小孩危害更明显。
本实验建立了固相萃取结合高效液相色谱串联质谱检测花生中甜蜜素的方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
ab sciex api 4000 质谱仪；
博纳艾杰尔12位负压spe装置；
试剂材料
甲醇为色谱纯，实验用水为超纯水，氨水为分析纯，乙腈为质谱纯，乙酸铵，甜蜜素标准物质纯度99.9%。
一次性无菌注射器；nylon针式过滤器（0.22 µm，直径13 mm）；
cleanert® pwax固相萃取柱：150 mg/6 ml。
样品制备
样品提取
称取3 g样品于50 ml离心管中，加20 ml水，超声20 min，每10 min振匀1 min，冷冻5 min，10000 rpm/min离心10 min，取上清液至50 ml容量瓶中，残渣加15 ml水二次提取，10000 rpm/min离心10 min取上清至50 ml容量瓶中，再用10 ml水洗涤残渣，10000 rpm/min离心10 min取上清至50 ml容量瓶中，用纯净水定容至刻度，摇匀，用0.45 µm nylon针式过滤器过滤，滤液待净化。
样品净化
先将小柱用5 ml甲醇，5 ml水活化平衡，取1 ml待净化液上spe柱，分别用5 ml水和5 ml 10%甲醇水溶液（v/v，体积比）淋洗，抽干小柱，用5 ml 2%的氨化甲醇溶液（v/v，体积比）洗脱，收集洗脱液，用超纯水定容到10 ml，过0.22 µm nylon针式过滤器后待测。
以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil® xbp c8，5 µm，150 å，3.0 × 50 mm
流动相：a：0.01 mol/l乙酸铵水溶液；b：乙腈；
流 速：0.4 ml/min
柱 温：30℃
进样量：5 µl
流动相梯度见表1：
表1.流动相梯度
时间/min | a/% | b/% |
0 | 97 | 3 |
0.5 | 97 | 3 |
3 | 50 | 50 |
5 | 50 | 50 |
5.5 | 97 | 3 |
10 | 97 | 3 |
质谱条件：
离子源：esi-；电喷雾电压：-4500 v；雾化气压力：50 psi；气帘气压力：35 psi；辅助气压力：50 psi；离子源温度：500℃； 监测方式：多反应监测（mrm）
定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量见表2：
表2.甜蜜素的定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量
名称 | 母离子m/z | 子离子m/z | 碎裂电压dp | 碰撞能量ce |
甜蜜素 | 178 | 80* | -40 | -24 |
96 | -40 | -20 |
“*”定量离子
结果与讨论
实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱串联质谱法检测食品中甜蜜素，花生基质加标回收率82.9%，变异系数小于1.0%，能够满足检测标准要求。
表3.花生中甜蜜素回收率实验结果
物质名称 | 保留时间/min | 本底含量 /mg/kg | 添加水平/mg/kg | 回收率 /% | cv /% |
甜蜜素 | 3.83 | 175.3 | 166.7 | 82.9 | 0.86 |
图1. 2 µg/ml甜蜜素标准溶液的lc-ms/ms色谱图
图2.花生空白lc-ms/ms色谱图
图3.花生基质加标（加标量为166.7 mg/kg）的lc-ms/ms色谱图
结论
本实验建立了花生中甜蜜素的检测方法，并结合高效液相色谱串联质谱对花生中甜蜜素的含量进行测定。加标量为166.7 mg/kg回收率为82.9%，变异系数小于1.0%，符合实验要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil® xbp c8（l） | 5 µm，150 å，3.0 × 50 mm | 1支 | vx850503-l |
cleanert® pwax | 150 mg/6 ml | 30支/包 | wa1506 |
qdaura®卓睿全自动固相萃取系统 | 4通道 | 1台 | spe-40 |
15位氮吹仪 | 15位 | 1台 | nv15-g |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
nylon针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.22 µm | 200/pk | as021320 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：af10136
