前言
农药残留是农药使用后一个时期内没有被分解而残留于生物体、收获物、土壤、水体、大气中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。施用于作物上的农药，其中一部分附着于作物上，一部分散落在土壤、大气和水等环境中，环境残存的农药中的一部分又会被植物吸收。残留农药直接通过植物果实或水、大气到达人、畜体内，或通过环境、食物链最终传递给人、畜。到目前为止，世界上化学农药年产量近200万吨，约有1000多种人工合成化合物被用作杀虫剂、杀菌剂、杀藻剂、除虫剂、落叶剂等类农药。农药尤其是有机农药大量施用，造成严重的农药污染问题，成为对人体健康的 严重威胁。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
ab sciex api 4000 液相质谱联用仪
试剂材料
甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水；氨水为分析纯；
农药混合标准工作液：0.01 µg/ml，甲醇溶解；
cleanert pep-2：60 mg/3 ml。
样品制备
样品提取
称取食盐10 g于100 ml水中，震荡溶解，待净化。
样品净化
先将pep-2（60 mg/3 ml）小柱依次用5 ml甲醇，5 ml水活化平衡；然后将待净化液以10 ml/min的流速通过小柱，弃去全部流出液，用5 ml水淋洗小柱并抽干；最后用5 ml 5%氨化甲醇（v/v）洗脱。收集洗脱液于45℃氮气吹干，用1 ml 20%乙腈水（v/v）溶解残留物后，直接进样检测。
色谱条件
液相条件
色谱柱：venusil mp c18，3 µm，100 å，3.0 × 50 mm
流动相：a：水；b：乙腈
柱 温：30℃
进样量：5 µl
质谱条件
正离子模式
离子源：esi ；电喷雾电压：4500 v；雾化气压力：45 psi；气帘气压力：20 psi；辅助气压力：45 psi；离子源温度：450℃；采集方式：scheduled mrm。
负离子模式
离子源：esi-；电喷雾电压：-4500 v；雾化气压力：40 psi；气帘气压力：25 psi；辅助气压力：40 psi；离子源温度：550℃；采集方式：多反应监测(mrm)。
梯度洗脱：
表1.液相色谱梯度洗脱条件
时间/min | 流速/ml/min | a/% | b/% |
0.50 | 0.40 | 95 | 5 |
1.00 | 0.40 | 60 | 40 |
3.00 | 0.40 | 15 | 85 |
4.50 | 0.40 | 5 | 95 |
6.00 | 0.40 | 5 | 95 |
6.10 | 0.40 | 95 | 5 |
12.00 | 0.40 | 95 | 5 |
质谱参数：见表3
表2. 26种农药质谱参数
物质名称 | q1 | q3 | dp/v | ce/v |
多菌灵 | 192.0 | 160.0 | 80 | 25 |
132.0 | 80 | 41 | ||
啶虫脒 | 223.0 | 126.0 | 70 | 27 |
99.0 | 70 | 47 | ||
吡虫啉 | 256.1 | 209.0 | 60 | 23 |
175.0 | 60 | 26 | ||
噻虫嗪 | 292.0 | 211.0 | 60 | 18 |
181.0 | 60 | 32 | ||
烯酰吗啉 | 388.1 | 301.0 | 115 | 29 |
165.0 | 115 | 43 | ||
苯醚甲环唑 | 406.1 | 251.0 | 120 | 37 |
337.0 | 120 | 23 | ||
三唑磷 | 314.0 | 162.0 | 70 | 25 |
119.1 | 70 | 47 | ||
克百威 | 222.1 | 165.0 | 70 | 17 |
123.1 | 70 | 29 | ||
咪鲜胺 | 376.2 | 308.0 | 65 | 17 |
70.1 | 65 | 43 | ||
除虫脲 | 311.0 | 158.0 | 72 | 21 |
141.2 | 72 | 47 | ||
甲基异柳磷 | 273.0 | 231.0 | 39 | 13 |
121.1 | 39 | 33 | ||
敌敌畏 | 221.0 | 109.0 | 70 | 23 |
127.0 | 70 | 25 | ||
灭多威 | 163.0 | 106.0 | 38 | 13 |
88.0 | 38 | 13 | ||
嘧霉胺 | 200.0 | 107.0 | 91 | 34 |
82.0 | 91 | 37 | ||
涕灭威 | 116.1 | 89.0 | 47 | 10 |
70.0 | 47 | 10 | ||
乐果 | 230.0 | 125.0 | 56 | 29 |
199.0 | 56 | 13 | ||
3-羟基克百威 | 238.0 | 181.0 | 65 | 14 |
163.0 | 65 | 20 | ||
涕灭威砜 | 223.0 | 148.0 | 63 | 12 |
76.1 | 63 | 10 | ||
水胺硫磷 | 273.1 | 231.0 | 67 | 15 |
121.0 | 67 | 32 | ||
三唑酮 | 294.0 | 197.0 | 81 | 21 |
225.0 | 81 | 17 | ||
灭幼脲 | 309.0 | 156.0 | 75 | 20 |
139.0 | 75 | 44 | ||
嘧菌酯 | 404.1 | 372.0 | 70 | 20 |
344.1 | 70 | 34 | ||
甲维盐 | 886.5 | 158.1 | 120 | 37 |
302.1 | 120 | 39 | ||
4-氯苯氧乙酸 | 185.0 | 127.0 | -45 | -17 |
91.0 | -39 | -40 | ||
187.0 | 129.0 | -43 | -17 | |
2-萘乙酸 | 187.0 | 141.0 | -18 | -9 |
2,4-d | 218.9 | 161.0 | -36 | -17 |
125.0 | -32 | -36 |
实验结果
表3.食盐中加标回收实验结果(添加水平1.0 µg/kg)
物质名称 | 平均回收率/% | 变异系数/% |
多菌灵 | 105.2 | 12.2 |
啶虫脒 | 101.7 | 8.2 |
吡虫啉 | 108.5 | 5.1 |
噻虫嗪 | 90.6 | 4.3 |
烯酰吗啉 | 104.8 | 7.8 |
苯醚甲环唑 | 80.6 | 5.5 |
三唑磷 | 100.0 | 3.1 |
克百威 | 80.8 | 3.3 |
咪鲜胺 | 73.5 | 4.0 |
除虫脲 | 69.6 | 9.0 |
甲基异柳磷 | 91.8 | 1.8 |
敌敌畏 | 62.2 | 7.3 |
灭多威 | 86.6 | 6.7 |
嘧霉胺 | 90.3 | 2.3 |
涕灭威 | 76.9 | 10.6 |
乐果 | 94.0 | 2.3 |
3-羟基克百威 | 88.8 | 4.2 |
涕灭威砜 | 72.6 | 12.5 |
水胺硫磷 | 74.2 | 13.3 |
三唑酮 | 110.0 | 7.3 |
灭幼脲 | 81.7 | 9.0 |
嘧菌酯 | 99.7 | 0.3 |
甲维盐 | 67.9 | 14.2 |
4-氯苯氧乙酸 | 85.2 | 1.3 |
2-萘乙酸 | 98.5 | 0.7 |
2,4-d | 91.0 | 6.9 |
实验谱图
图1. 正模式0.01 µg/ml标准溶液lc-ms/ms色谱图
图2. 负模式0.01 µg/ml标准溶液lc-ms/ms色谱图
图3. 正模式1.0 μg/kg食盐基质混合标准工作液lc-ms/ms色谱图
图4. 负模式1.0 μg/kg食盐基质混合标准工作液lc-ms/ms色谱图
图5. 正模式食盐空白基质lc-ms/ms色谱图
图6. 负模式食盐空白基质lc-ms/ms色谱图
图7. 正模式1.0 μg/kg食盐基质加标lc-ms/ms色谱图
图8. 负模式1.0 μg/kg食盐基质加标lc-ms/ms色谱图
结论
本实验建立了食盐中农药的lc-ms/ms检测方法，并结合固相萃取技术对食盐中农药的含量进行了测定。对于加标量为1.0 µg/kg的样品，农残样品回收率在60% ~ 110%，变异系数小于15%，能够满足实验要求。说明cleanert pep-2小柱可以用于食盐中农残的检测，且稳定性良好。由图1 ~ 图8可知，用venusil mp c18色谱柱检测26种农药，分离度和峰形良好，且保留时间稳定。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil mp c18 | 3 µm，100 å，3.0 × 50 mm | 1支 | va930503-0 |
cleanert pep-2 | 60 mg/3 ml | 50支/pk | pe0603-2 |
m08型正压固相萃取装置 | 8通道，配大体积上样 | 1台 | spe-m08 |
15位氮吹仪 | 15位 | 1台 | nv15-m |
保护柱芯 | 3 µm，100 å；3.0 × 10 mm | 4支/包 | va930103-0 |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：af10134
