前言
食品抗氧化剂是能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。氧化反应不仅会使食品中的油脂变质，而且还会使食品褪色、变色和破坏维生素等，从而降低食品的感官质量和营养价值，甚至产生有害物质，引起食物中毒。
由于合成抗氧化剂化学性质稳定，价格比较优惠且有较好的效果，在预防脂质氧化的方法中，往往被优先考虑，一般使用的合成抗氧化剂有bha、bht、tbhq等。
然而由于这些抗氧化剂不是食品成分之一，而且在食品工业中存在很多违规操作，抗氧化剂的添加往往超出规定的标准，越来越多的研究表明：人工合成的抗氧化剂有一定的毒副作用，有害人们的身心健康，因此对食品中合成抗氧化剂的测定显得尤为重要。
本实验建立了高效液相色谱法检测花生油中8种抗氧化剂的方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪（紫外检测器）；博纳艾杰尔12位负压spe装置。
试剂材料
乙腈、甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水，8种抗氧化剂标准品及化学式，cas号见表1；
表1.食品中8种抗氧化剂中文与英文名称、cas号
序号 | 中文名称 | 英文名称 | 英文简称 | cas号 | |
1 | 没食子酸丙酯 | propyl gallate | pg | 121-79-9 | |
2 | 叔丁基对苯二酚 | tert-butylhydroquinone | tbhq | 1948-33-0 | |
3 | 去甲二氢愈创木酸 | nordihydroguaiaretic acid | ndga | 500-38-9 | |
4 | 叔丁基对羟基茴香醚 | butylhydroxyanisole | bha | 25013-16-5 | |
5 | 2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚 | 2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol | ionox-100 | 489-01-0 | |
6 | 没食子酸辛酯 | octyl gallate | og | 1034-01-1 | |
7 | 2,6-二叔丁基对甲基苯酚 | butylated hydroxytoluene | bht | 128-37-0 | |
8 | 没食子酸十二酯 | dodecyl gallate | dg | 1166-52-5 | |
一次性无菌注射器；nylon针式过滤器 (0.22 µm，直径13 mm) ；
cleanert s c18-n固相萃取柱：2000 mg/12 ml
样品制备
样品提取
称1 g样品至50 ml离心管中，加10 ml乙腈，震荡2 min，超声10 min，3000 r/min离心5 min，收集上清液至鸡心瓶中，再加10 ml乙腈萃取，震荡2 min，超声1 min，3000 r/min离心5 min合并上清液。
样品净化
先将小柱用5 ml甲醇，5 ml乙腈活化平衡，然后将待净化液上spe柱，收集流出液，再用10 ml乙腈︰甲醇=2︰1（v/v）进行洗脱，并收集洗脱液，40℃蒸干，用1 ml乙腈溶解残留物，过0.22 µm nylon针式过滤器后待测。
以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil® xbp c18（l），5 µm，150 å，4.6 × 250 mm
流动相：a: 0.5%甲酸水溶液；b:甲醇；
流 速：1 ml/min
柱 温：35℃
进样量：5 µl
检测波长：280 nm
流动相梯度见表2
表2.流动相梯度
时间/min | a/% | b/% |
0 | 40 | 60 |
15 | 30 | 70 |
25 | 0 | 100 |
30 | 0 | 100 |
31 | 40 | 60 |
35 | 40 | 60 |
结果与讨论
实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测食品中8种抗氧化剂，花生油基质加标回收率89% ~ 106%，变异系数小于6.0%，能够满足检测标准要求。
表3. 花生油中8种抗氧化剂加标回收实验结果
物质名称 | 保留时间/min | 添加水平/mg/kg | 回收率 /% | cv /% |
pg | 4.430 | 171 | 93.8 | 4.3 |
tbhq | 6.058 | 135 | 100.6 | 2.5 |
ndga | 11.447 | 121 | 95.5 | 5.8 |
bha | 13.078 | 213 | 105.0 | 3.0 |
ionox-100 | 17.806 | 141 | 105.2 | 2.8 |
og | 20.920 | 95 | 93.5 | 4.2 |
bht | 26.506 | 151 | 101.3 | 2.7 |
dg | 26.804 | 135 | 89.5 | 4.3 |
图1. 8种抗氧化剂标准溶液液相色谱图（标准浓度：pg: 171 µg/ml、tbhq: 135 µg/ml、ndga: 121 µg/ml、bha: 213 µg/ml、ionox-100: 141 µg/ml、og: 95 µg/ml、bht: 151 µg/ml、dg: 135 µg/ml）
图2. 花生油基质空白液相色谱图
图3. 花生油基质加标液相色谱图（加标浓度：pg: 171 mg/kg、tbhq: 135 mg/kg、ndga: 121 mg/kg、bha: 213 mg/kg、ionox-100: 141 mg/kg、og: 95 mg/kg、bht: 151 mg/kg、dg: 135 mg/kg）
图4. 乙腈提取后氮气吹干油样残留（左：1 g油样；右：净化后油样残留）
结论
本实验建立了花生油中8种抗氧化剂的检测方法，并结合高效液相色谱对花生油中8种抗氧化剂含量进行测定。对加标量为pg: 171 mg/kg、tbhq: 135 mg/kg、ndga: 121 mg/kg、bha: 213 mg/kg、ionox-100: 141 mg/kg、og: 95 mg/kg、bht: 151 mg/kg、dg: 135 mg/kg 的花生油样品，回收率在89% ~ 106%之间，变异系数小于6.0%，符合实验要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil® xbp c18(l) | 5 µm，150 å，4.6 × 250 mm | 1支 | vx952505-l |
cleanert s c18-n | 2000 mg/12 ml | 20支/包 | s18200012n |
qdaura®卓睿全自动固相萃取系统 | 4通道 | 1台 | spe-40 |
15位氮吹仪 | 15位 | 1台 | nv15-m |
保护柱套 | 适用于4.6 × 10 mm和2.1 × 10 mm | 1支 | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 5 µm，150 å；4.6 × 10 mm | 4支/包 | vx950105-ls |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
nylon针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.22 µm | 200/pk | as021320 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：af10133
