前言
食品抗氧化剂是能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。氧化反应不仅会使食品中的油脂变质，而且还会使食品退色、变色和破坏维生素等，从而降低食品的感官质量和营养价值，甚至产生有害物质，引起食物中毒。
由于合成抗氧化剂化学性质稳定，价格比较优惠且有较好的效果，在预防脂质氧化的方法中，往往被优先考虑，一般使用的合成抗氧化剂有bha、bht、tbhq等。
然而由于这些抗氧化剂不是食品成分之一，而且在食品工业中存在很多违规操作，抗氧化剂的添加往往超出规定的标准，越来越多的研究表明：人工合成的抗氧化剂有一定的毒副作用，有害人们的身心健康，因此对食品中合成抗氧化剂的测定显得尤为重要。
本实验建立了高效液相色谱法检测食品中8种抗氧化剂的方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪（紫外检测器）；
博纳艾杰尔12位负压spe装置；
qdaura®卓睿全自动固相萃取系统。
试剂材料
乙腈、甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水，8种抗氧化剂标准品及化学式，cas号见表1；
表1.食品中8种抗氧化剂中文与英文名称、cas号
序号 | 中文名称 | 英文名称 | 英文简称 | cas号 | |
1 | 没食子酸丙酯 | propyl gallate | pg | 121-79-9 | |
2 | 叔丁基对苯二酚 | tert-butylhydroquinone | tbhq | 1948-33-0 | |
3 | 去甲二氢愈创木酸 | nordihydroguaiaretic acid | ndga | 500-38-9 | |
4 | 叔丁基对羟基茴香醚 | butylhydroxyanisole | bha | 25013-16-5 | |
5 | 2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚 | 2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol | ionox-100 | 489-01-0 | |
6 | 没食子酸辛酯 | octyl gallate | og | 1034-01-1 | |
7 | 2,6-二叔丁基对甲基苯酚 | butylated hydroxytoluene | bht | 128-37-0 | |
8 | 没食子酸十二酯 | dodecyl gallate | dg | 1166-52-5 | |
一次性无菌注射器；nylon针式过滤器 (0.22 µm，直径13 mm) ；
cleanert s c18-n固相萃取柱：2000 mg/12 ml；
样品制备
样品提取
称1 g样品至50 ml离心管中，加10 ml乙腈，震荡2 min，超声10 min，3000 r/min离心5 min，收集上清液至鸡心瓶中，再加10 ml乙腈，震荡2 min，超声1 min，3000 r/min离心5 min合并上清液。
样品净化
先将小柱用5 ml甲醇，5ml乙腈活化平衡，然后将待净化液上spe柱，收集流出液，再用10 ml 乙腈：甲醇=2:1（v/v）进行淋洗，并收集洗脱液，40℃蒸干，用1 ml乙腈溶解残留物，过0.22 µm nylon针式过滤器后待测。
以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil xbp c18（l），5 µm，150 å，4.6 × 250 mm
流动相：a: 0.5%甲酸水溶液；b: 甲醇；流速：1 ml/min
柱 温：35℃
进样量：5 µl
检测波长：280 nm
流动相梯度见表2：
表2.流动相梯度
时间/min | a/% | b/% |
0 | 40 | 60 |
15 | 30 | 70 |
25 | 0 | 100 |
30 | 0 | 100 |
31 | 40 | 60 |
35 | 40 | 60 |
卓睿全自动固相萃取仪spe-40条件：
结果与讨论
实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测食品中8种抗氧化剂，手动分析时饼干基质加标8种抗氧化剂回收率85%~100%，采用卓睿全自动固相萃取仪spe-40分析时 8种抗氧剂回收率88%~96%，能够满足检测要求。
表3.饼干中8种抗氧化剂加标回收实验结果
物质名称 | 保留时间/min | 手动分析 | spe-40分析 | ||||
添加水平/mg/kg | 回收率 /% | cv /% | 添加水平/mg/kg | 回收率 /% | cv /% | ||
pg | 4.416 | 129 | 92.7 | 5.8 | 684 | 91.8 | -2.5 |
tbhq | 5.974 | 121 | 86.0 | 11.6 | 540 | 93.5 | -2.6 |
ndga | 11.095 | 119 | 100.3 | 4.9 | 484 | 93.6 | -2.1 |
bha | 12.798 | 240 | 98.4 | -0.7 | 852 | 95.5 | -4.5 |
ionox-100 | 17.538 | 181 | 99.1 | 0.4 | 564 | 95.5 | -4.4 |
og | 20.627 | 117 | 90.4 | 6.1 | 380 | 90.7 | -2.5 |
bht | 26.444 | 155 | 89.6 | -4.5 | 604 | 92.7 | -3.6 |
dg | 26.704 | 147 | 85.9 | 7.7 | 540 | 88.4 | -2.6 |
图1. 8种抗氧化剂标准溶液液相色谱图
（标准浓度：pg: 129 µg/ml、tbhq: 121 µg/ml、ndga: 119 µg/ml、bha: 240 µg/ml、ionox-100: 181 µg/ml、og: 117 µg/ml、bht: 155 µg/ml、dg: 147 µg/ml）
图2. 饼干基质空白液相色谱图
图3. 饼干基质加标液相色谱图
（加标浓度：pg: 129mg/kg、tbhq: 121 mg/kg、ndga: 119 mg/kg、bha: 240 mg/kg、ionox-100: 181 mg/kg、og: 117 mg/kg、bht: 155 mg/kg、dg: 147 mg/kg）
结论
本实验建立了饼干中8种抗氧化剂的检测方法，并结合高效液相色谱对饼干中8种抗氧化剂含量进行测定。对于加标量分别为pg: 129 mg/kg、tbhq: 121 mg/kg、ndga: 119 mg/kg、bha: 240 mg/kg、ionox-100: 181 mg/kg、og: 117 mg/kg、bht: 155 mg/kg、dg: 147 mg/kg 的饼干样品，8种抗氧化剂回收率在85% ~ 100%之间，符合实验要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil xbp c18(l) | 5 µm，150 å，4.6 × 250 mm | 1支 | vx952505-l |
cleanert s c18-n | 2000 mg/12 ml | 20支/包 | s18200012n |
qdaura®卓睿全自动固相萃取系统 | 4通道 | 1台 | spe-40 |
15位氮吹仪 | 15位 | 1台 | nv15-m |
保护柱套 | 适用于4.6 × 10 mm和2.1 × 10 mm | 1支 | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 5 µm，150 å；4.6 × 10 mm | 4支/包 | vx950105-ls |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
nylon针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.22 µm | 200/pk | as021320 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：af10132
