前言
罗丹明b(rhodamine b)又称玫瑰红b,或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成的染料。经老鼠试验发现，罗丹明b会引致皮下组织生肉瘤，被怀疑是致癌物质。罗丹明b在溶液中有强烈的荧光，用作实验室中细胞荧光染色剂、有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。曾经用作食品添加剂，但后来实验证明罗丹明b会致癌，现在已不允许用作食品染色。
因此通过有效的实验技术手段，对辣椒油中的有关罗丹明b残留进行监控，以确保消费者对辣椒油消费的安全具有重要意义。
本实验通过优化前处理方法建立了罗丹明b在辣椒油中的高效液相色谱的检测方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪（紫外检测器）；
博纳艾杰尔12位负压spe装置。
试剂材料
丙酮、甲醇、正己烷为色谱纯；实验用水为超纯水；罗丹明b标准品（纯度99%）；
一次性无菌注射器；nylon针式过滤器(0.45 µm，直径13 mm)；
cleanert alumina-n固相萃取柱：2000 mg/6 ml
样品制备
样品提取
称取1 g辣椒油于40 ml玻璃瓶中，加入10 ml 20%丙酮的正己烷溶液（v/v），振荡摇匀后待净化。
样品净化
先将小柱用6 ml正己烷活化平衡，然后将待净化液过柱，弃去全部流出液，然后用10 ml 20%丙酮的正己烷溶液（v/v）进行淋洗，最后用10 ml 2%氨化甲醇（v/v）洗脱。收集洗脱液于40℃氮气吹干，用1 ml甲醇溶解残留物，过0.45 µm nylon针式过滤器后待测。
以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil mp c18，5 µm，100 å，4.6 × 150 mm
流动相：甲醇︰水=75︰25（v/v）
柱 温：30℃
进样量：20 µl
检测波长：550 nm
结果与讨论
实验结果
由表1可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测罗丹明b，辣椒油基质加标回收率在90%以上，能够满足标准要求。
表1.辣椒油中罗丹明b加标回收实验结果
物质名称 | 保留时间 | 添加水平/mg/kg | 平均回收率 /% | rsd /% |
罗丹明b | 5.578 | 0.05 | 95.7 | 1.3 |
图1. 0.05 µg/ml罗丹明b标准溶液液相色谱图
图2. 辣椒油基质空白液相色谱图
图3. 0.05 mg/kg辣椒油基质加标液相色谱图
结论
本实验建立了辣椒油中罗丹明b残留量的检测方法，并结合高效液相色谱对辣椒油中罗丹明b的含量进行了测定。对于加标量为0.05 mg/kg的辣椒油样品，回收率在90% ~ 100%之间，符合实验要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil mp c18 | 5 µm，100 å，4.6 × 150 mm | 1支 | va951505-0 |
cleanert alumina-n | 2000 mg/6 ml | 30支/包 | al20006n |
qdaura® 卓睿全自动固相萃取系统 | 4通道 | 1台 | spe-40 |
15位氮吹仪 | 15位 | 1台 | nv15-m |
保护柱套 | 适用于4.6 × 10 mm和2.1 × 10 mm | 1支 | sh-100 |
直联式保护柱芯 | 5 µm，100 å；4.6 × 10 mm | 4支/包 | va950105-0s |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
nylon针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.45 µm | 200个/包 | as021345 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：af10029
