前言
头孢氨苄，是头孢菌素类的一种，是β-内酰胺类抗生素。它能抑制细胞壁的合成，使细胞内容物膨胀支破裂溶解，杀死细胞。作为国内仿制药，需要做药物一致性评价，要将其中的杂质制备出来，本实验开发了头孢氨苄某杂质制备方法。
表1.头孢氨苄样品信息
样品名称 | 英文名 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas编号 |
头孢氨苄 | cephalexin |
| c16h17n3o4s | 347.39 | 15686-71-2 |
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
cheetah hp 100高压制备系统
试剂材料
去离子水；乙腈为色谱纯；乙酸铵为色谱纯
高压制备柱：innoval ods-p 5 µm，100 å，50×250 mm
头孢氨苄样品：客户提供
样品前处理
样品为白色固体，称取2.9 g样品，加30 ml水，6 ml乙酸，超声溶解，过0.22 µm针式过滤器后上样
高压制备条件
色谱柱：innoval ods-p 5 µm，100 å，50×250 mm；
流动相：a：去离子水（10mm乙酸铵）b：乙腈：甲醇=1:1
检测器：220nm（红色信号线）280nm（蓝色信号线）
流 速：80.0 ml/min
进样量：500 mg
梯 度：
表2. 制备色谱梯度洗脱表
时间/min | 流速/(ml/min) | a/% | b/% |
0.0 | 80.0 | 90.0 | 10.0 |
40.0 | 80.0 | 90.0 | 10.0 |
液相检测条件
色谱柱：innoval ods-p 5 µm，100 å，4.6×250 mm；
流动相：a：去离子水（10mm乙酸铵）b：乙腈：甲醇=1:1
检测器：220nm
流 速：1.0 ml/min
进样量：10 µl
梯 度：
表2. 制备色谱梯度洗脱表
时间/min | 流速/(ml/min) | a/% | b/% |
0.0 | 1.0 | 90.0 | 10.0 |
40.0 | 1.0 | 90.0 | 10.0 |
结果与讨论
头孢氨苄粗品经innoval ods-p（5 µm，100 å，50×250mm）纯化，由表2和图1可知，流动相为去离子水（10mm乙酸铵）与乙腈和甲醇，进行等度洗脱，可以分离得到98%纯度的杂质。
图1. 高压制备色谱图
图2. 纯度检测色谱图
结论
本实验中通过高压制备液相用innoval ods-p 制备柱分离纯化头孢氨苄原料药中的杂质，结果分离效果良好，所得杂质产物纯度达到98%。
附：相关产品
产品名称 | 规格 | 包装数量 | 订货号 |
innoval ods-p | 5 µm 100 å 4.6 × 250 mm | 1支 | ix952505-p |
innoval ods-p | 5µm 100 å 50 × 250 mm | 1支 | ix952550-p |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
一次性注射器 | 10 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-10ml |
液相进样针 | 20 µl，平头 | 1支/盒 | jyz-20ul |
针筒过滤器 | 0.45 µm 13 mm 单膜 | 200个/包 | as041345-t |
应用编号：pp10140