前言
曲克芦丁系芦丁经羟乙基化制成的半合成黄酮化合物，能抑制血小板的凝集，有防止血栓形成的作用。同时具有对抗5-羟色胺、缓激肽引起的血管损伤，增加毛细血管抵抗力，降低毛细血管通透性，防止血管通透性升高引起的水肿等作用。
表1. 曲克芦丁有关物质样品信息
样品名称 | 英文名 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas编号 |
曲克芦丁 | troxerutin |
| c27h30o16 | 610.52 | 56764-99-9 |
芦丁 | rutin |
| c27h30o16.3(h2o) | 664.57 | 153-18-4 |
四羟乙基芦丁 | tetra(hydroxyethyl)rutoside |
| c35h46o20 | 786.74 | 6980-20-7 |
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪，紫外检测器；
试剂材料
屈臣氏水；乙腈为色谱纯；磷酸二氢钠、磷酸为分析纯；
曲克芦丁系统适用性溶液：由某医药公司提供；
高效液相色谱柱：venusil® mp c18； 5 μm，100 å，4.6 × 250 mm；
有关物质色谱条件
色谱柱：venusil® mp c18； 5 μm，100 å，4.6 × 250 mm；
流动相a：0.1 mol/l磷酸二氢钠溶液(磷酸调节ph至4.4)；
流动相b：乙腈；
波 长：254 nm；
柱 温：30℃；
流 速：0.5 ml/min；
进样量：10 µl。
表2.梯度洗脱程序
时间/min | 流动相a/% | 流动相b/% |
0 | 80 | 20 |
30 | 80 | 20 |
33 | 65 | 35 |
45 | 65 | 35 |
48 | 80 | 20 |
58 | 80 | 20 |
含量测定色谱条件
色谱柱：venusil® mp c18； 5 μm，100 å，4.6 × 250 mm；
流动相：0.1 mol/l磷酸二氢钠溶液(磷酸调节ph至4.4) ︰乙腈=80︰20(v/v)；
波 长：254 nm；
柱 温：30℃；
流 速：0.5 ml/min；
进样量：10 µl。
结果与讨论
本实验按照ch.p2015版二部曲克芦丁项下方法，使用venusil® mp c18色谱柱对曲克芦丁系统适用性溶液进行检测，由表3及图可知，在上述两种色谱条件下，曲克芦丁均具有良好峰形，与相邻杂质峰分离度均大于1.5，满足药典要求。
表3.曲克芦丁系统适用性溶液实验数据
色谱条件 | 化合物名称 | 保留时间/min | 相对保留时间 | 理论塔板数(usp) | 拖尾因子 | 分离度(usp) |
有关物质 | 四羟乙基芦丁 | 10.723 | 0.508 | 13317 | 1.099 | — |
一羟乙基芦丁 | 18.256 | 0.864 | 18105 | 1.170 | 16.478 | |
芦丁 | 19.777 | 0.936 | 18976 | 1.099 | 2.723 | |
曲克芦丁 | 21.121 | 1.000 | 17699 | 1.094 | 2.222 | |
二羟乙基芦丁 | 22.935 | 1.086 | 18509 | 1.090 | 2.772 | |
杂质1 | 24.183 | — | 19255 | — | 1.820 | |
杂质2 | 24.754 | — | — | — | — | |
含量测定 | 四羟乙基芦丁 | 10.066 | 0.515 | 13207 | 1.102 | — |
一羟乙基芦丁 | 17.080 | 0.804 | 17171 | 1.140 | 16.092 | |
芦丁 | 18.541 | 0.873 | 18399 | 1.097 | 2.736 | |
曲克芦丁 | 19.550 | 1.000 | 17396 | 1.098 | 1.771 | |
二羟乙基芦丁 | 21.250 | 1.090 | 18254 | 1.095 | 2.782 | |
杂质1 | 22.386 | — | 18619 | — | 1.768 | |
杂质2 | 23.059 | — | 8526 | — | 0.813 |
图1.venusil mp c18色谱柱曲克芦丁有关物质系统适用性溶液高效液相色谱图
图2.venusil mp c18色谱柱曲克芦丁有关物质系统适用性溶液高效液相色谱图
(纵坐标局部放大图)
图3.venusil mp c18色谱柱曲克芦丁含量测定系统适用性溶液高效液相色谱图
图4.venusil mp c18色谱柱曲克芦丁含量测定系统适用性溶液高效液相色谱图
(纵坐标局部放大图)
结论
本实验按照ch.p2015版二部曲克芦丁项下方法，使用venusil® mp c18色谱柱对曲克芦丁系统适用性溶液进行检测，结果表明在上述实验条件下，venusil® mp c18色谱柱测试结果满足药典有关物质和含量测定的要求，可用于系统适用性溶液的分离分析。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil® mp c18 | 5 μm，100å；4.6 × 250mm | 1支 | va952505-0 |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a；1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
微孔滤膜 | 单膜，13 mm，0.45 μm | 100个/包 | as021345-t |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：ap0040
