前言
维生素c (vitamin c，又称l-抗坏血酸) 为酸性己糖衍生物，是烯醇式己糖酸内酯，vc主要来源新鲜水果和蔬菜，是高等灵长类动物与其他少数生物的必需营养素。vc有l-型和d-型两种异构体，只有l-型的才具有生理功能，还原型和氧化型都有生理活性。
本实验建立了高效液相色谱法检测食品中抗坏血酸的方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪（紫外检测器）；
试剂材料
甲醇为色谱纯；偏磷酸、偏磷酸三钠、磷酸、磷酸二氢钾为分析纯，l-半胱氨酸为优级纯，实验用水为超纯水，标准品及化学式，cas号见表1；
表1.抗坏血酸中文与英文名称、cas号
序号 | 中文名称 | 英文名称 | cas号 |
1 | l ( )-抗坏血酸 | l ( )-ascorbic acid | 51-81-7 |
2 | d ( )-抗坏血酸 | d ( )-ascorbic acid | 89-65-6 |
一次性无菌注射器；nylon针式过滤器 (0.22 µm，直径13 mm) ；
样品制备
样品提取：
称取样品约0.5 g ~ 2 g (精确至0.001 g) 混合均匀的固体试样 (使所取试样含l( )-抗坏血酸约0.03 mg ~ 6 mg) 于50 ml离心管中，用20 g/l的偏磷酸溶液，将试样转移至50 ml容量瓶中，震摇溶解并定容，摇匀后，全部转移至50 ml离心管中，超声提取5 min后，于4000 r/min离心5 min，取上清液过0.45 μm 水相滤膜，滤液待测 (由此试液可同时分别测定试样中l( )-抗坏血酸和d( )-抗坏血酸的含量)。
试样溶液的还原：
准确吸取20 ml上述离心后的上清液于50 ml离心管中，加入10 ml 40 g/l的l-半胱氨酸溶液，用100 g/l磷酸三钠溶液调节ph 至7.0 ~ 7.2，以200次/min振荡5 min。再用磷酸调节ph至2.5 ~ 2.8，用水将试液全部转移至50 ml容量瓶中，定容到刻度。混匀后取此试液过0.45 μm 水相滤膜后待测 (由此试液可测定试样中包括脱氢型的l( )-抗坏血酸总量)。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil c18 plus，5 µm，120 å，4.6 × 250 mm
流动相： a: 6.8 g 磷酸二氢钾，用水溶解并定容至1 l (用磷酸调ph 至2.5 ~ 2.8) ，b:100%甲醇。按a∶b=98∶2混合，过0.45 μm 滤膜，超声脱气。
流速：0.7 ml/min
柱 温：25℃
进样量：20 µl
检测波长：245 nm
结果与讨论
实验结果
表2. 奶粉中抗坏血酸加标回收实验结果
物质名称 | 保留时间/min | 添加水平/µg/ml | 回收率/% | cv/% |
l ( )-抗坏血酸 | 7.071 | 20 | 105 | 2.6 |
d ( )-抗坏血酸 | 7.552 | 20 | 93 | 3.8 |
图1. l ( )-抗坏血酸和d ( )-抗坏血酸50 µg/ml标准溶液液相色谱图
图2. 奶粉样品色谱图
图3. 奶粉基质加标液相色谱图
结论
本实验建立了奶粉中抗坏血酸的检测方法，并结合高效液相色谱对奶粉中抗坏血酸含量进行测定。加标量终浓度为20 µg /l时，l ( ) 抗坏血酸和d( )-抗坏血酸回收率在93% ~ 105%之间，变异系数小于4%，符合实验要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil c18 plus | 5 µm，120 å，4.6 × 250 mm | 1支 | vps952505-a |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
nylon针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.22 µm | 200/pk | as021320 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：af10166
