前言
维生素k1广泛地存在于绿色植物（如洋白菜、菠菜、绿茶）以及动物性食品的肝脏、瘦肉及油脂中，检测食品中维生素k1，可以帮助人们选择富含维生素k1的食品，以预防维生素k1缺乏症及其引起的各种疾病。
本实验建立了高效液相色谱法检测奶粉中维生素k1的方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪（荧光检测器）；
试剂材料
甲醇为色谱纯；乙醇、碳酸钾、正己烷、氢氧化钾、磷酸二氢钾为分析纯，实验用水为超纯水，脂肪酶酶活力 ≥ 700 u/mg，标准品及化学式，cas号见表1；
表1. 维生素k1中文与英文名称、cas号
序号 | 中文名称 | 英文名称 | cas号 |
1 | 维生素k1 | vitamin k1 | 84-80-0 |
一次性无菌注射器；nylon针式过滤器 (0.22 µm，直径13 mm) ；
样品制备
酶解：
准确称取经均质的试样1 g~5 g （精确0.01 g，维生素k1 含量不低于0.05 μg）于50 ml离心管中，加入5 ml温水溶解，加入磷酸盐缓冲液（ph = 8.0）5 ml，混匀，加入0.2 g脂肪酶和0.2 g淀粉酶（不含淀粉的样品可以不加淀粉酶），加盖，涡旋2 min~
3 min，混匀后，置于37℃ ±2℃ 恒温水浴振荡器中振荡2 h以上，使其充分酶解。
提取：
取出酶解完的试样，分别加入10 ml乙醇及1 g碳酸钾，混匀后加入10 ml 正己烷和10 ml水，涡旋或振荡提取10 min，6000 r/min离心5 min（如发生乳化现象，可适当增加正己烷或水的加入量，以排除乳化现象），转移上清液至100 ml旋蒸瓶中，向下层液再加入10 ml正己烷，重复操作1次，合并上清液至上述旋蒸瓶中。
浓缩：
将上述正己烷提取液旋蒸至干（如有残液，可用氮气轻吹至干），用甲醇转移并定容到5 ml容量瓶中，摇匀，0.22 μm 滤膜过滤，滤液待进样。
实验条件
液相条件
色谱柱：venusil c18 plus，5 µm，120 å，4.6 × 250 mm
锌还原柱：粒径50~70 µm，柱长 50 mm，内径 4.6 mm；
流动相：甲醇900 ml，四氢呋喃 100 ml，冰乙酸 0.3 ml，混匀后，加入氯化锌1.5g无水乙酸钠 0.5 g，超声溶解后，用 0.22µm 有机系滤膜过滤。
流 速：1 ml/min
柱 温：30 ℃
进样量：10 µl
检测波长：激发波长243nm，发射波长430nm
结果与讨论
实验结果
表2. 奶粉中维生素k1加标回收实验结果
物质名称 | 保留时间/min | 添加水平/ug/ml | 回收率/% | cv/% |
维生素k1 | 16.268 | 0.20 | 88.70 | 3.89 |
图1. 维生素k1 50µg/ml标准溶液液相色谱图
图2. 奶粉样品色谱图
图3. 奶粉基质加标液相色谱图
结论
本实验建立了奶粉中维生素k1的检测方法，并结合高效液相色谱对奶粉中维生素k1的含量进行测定。加标量终浓度为0.2µg /ml时，维生素k1的平均回收率为88.70%，变异系数3.89%，符合实验要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil c18 plus | 5 µm，120 å，4.6 × 250 mm | 1支 | vps952505-a |
zinc reduction | 粒径50~70 µm，4.6*50mm | 1支 | vzn9600505-0 |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
nylon针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.22 µm | 200/pk | as021320 |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：af10165
