前言
甲钴胺是一种内源性的辅酶b12，参与一碳单位循环，在由同型半胱氨酸合成蛋氨酸的转甲基反应过程中起重要作用。体外研究表明，甲钴胺可促进培养的大鼠组织中卵磷脂的合成和神经元髓鞘形成。
表1. 甲钴胺样品信息
样品名称 | 英文名 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas编号 |
甲钴胺 | mecobalamin |
| c63h91con13o14p | 1344.38 | 13422-55-4 |
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪，紫外检测器；
试剂材料
屈臣氏水；乙腈为色谱纯；磷酸二氢钾为分析纯；
甲钴胺胶囊：由某医药公司提供；
高效液相色谱柱：venusil® c18 plus ；5 µm，120 å；4.6 × 250 mm；
venusil® mp c18 ；5 µm，100 å；4.6 × 250 mm。
色谱条件
色谱柱1：venusil® c18 plus ；5 µm，120 å；4.6 × 250 mm；
色谱柱2：venusil® mp c18 ；5 µm，100 å；4.6 × 250 mm；
流动相：0.03 mol/l磷酸二氢钾溶液(ph4.5)︰乙腈=83︰17(v/v)；
波 长：342 nm；
流 速：1.2 ml/min；
进样量：20 µl；
温 度：45℃。
结果与讨论
本实验参照中国药典2015年版 二部甲钴胺胶囊中有关物质项下方法，分别使用venusil® c18 plus、venusil® mp c18 色谱柱对甲钴胺胶囊供试品溶液进行检测，由表2及图可知，在上述色谱条件下， 甲钴胺保留时间约12 min，与相邻杂质分离度为2.78、3.38。
表2.甲钴胺胶囊供试品溶液实验数据
色谱柱 | 化合物名称 | 保留时间/min | 理论塔板数 | 拖尾因子 | 分离度 | 备注 |
venusil® c18 plus | 甲钴胺 | 12.851 | 16066 | 1.05 | — | 图1、2 |
未知杂质1 | 14.005 | 17569 | 0.95 | 2.78 | ||
venusil® mp c18 | 甲钴胺 | 12.386 | 11446 | 1.06 | — | 图3、4 |
未知杂质1 | 13.982 | 13927 | 0.97 | 3.38 |
图1. venusil® c18 plus色谱柱用于甲钴胺供试品溶液高效液相色谱图
图2. venusil® c18 plus色谱柱用于甲钴胺供试品溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大)
图3. venusil® mp c18色谱柱用于甲钴胺供试品溶液高效液相色谱图
图4. venusil® mp c18色谱柱用于甲钴胺供试品溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大)
结论
本实验参照中国药典2015年版 二部甲钴胺胶囊有关物质项下方法，分别使用venusil® c18 plus、venusil® mp c18 色谱柱对甲钴胺胶囊供试品溶液进行检测，结果表明在上述实验条件下，venusil® c18 plus、venusil® mp c18 色谱柱结果均满足药典要求，可用于甲钴胺胶囊有关物质的检测。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil® c18 plus | 5 μm，120å；4.6 × 250mm | 1支 | vps952505-a |
venusil® mp c18 | 5 μm，100å；4.6 × 250mm | 1支 | va952505-0 |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫45°shore a；1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
微孔滤膜 | 单膜，13 mm，0.45 μm | 100个/包 | as021345-t |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
应用编号：ap10220