前言
草乌又名断肠草，为双子叶植物纲毛茛科植物乌头(野生种)、北乌头或其他多种同属植物的俗名。乌头各部分含生物碱，其中主为乌头碱。乌头碱水解后生成乌头原碱、醋酸及苯甲酸。
表1. 乌头碱化学信息
样品名称 | 英文名 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas编号 |
乌头碱 | aconitine |  | c34h47no11 | 645.74 | 302-27-2 |
实验部分
仪器、试剂与材料
试剂材料
异丙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、醋酸铵、冰醋酸、乙腈、四氢呋喃为色谱纯；
氨试液：取浓氨溶液400 ml，加水稀释至1000 ml，即得.
草乌药材：灰色粉末，由某设备仪器公司提供；
高效液相色谱柱：venusil® xbp c18(l)；5 μm，150 å，4.6 × 250 mm。
样品制备
取本品2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液3.0 ml，加入异丙醇-乙酸乙酯（1︰1）混合溶液50 ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用异丙醇—乙酸乙酯（1︰1）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。量取续滤液25 ml，40 ℃以下减压回收溶剂至干。残渣精密加入异丙醇—三氯甲烷（1︰1）混合溶液3 ml溶解，密塞，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品试液。
色谱条件
色谱柱：venusil® xbp c18(l)；5 μm，150 å，4.6 × 250 mm；
流动相a：乙腈︰四氢呋喃=25︰15（v/v）；
流动相b：0.1 mol/l醋酸铵溶液（每1000 ml加冰醋酸0.5 ml）；
检测波长：235 nm；
流速：1.0 ml/min；
柱温：30℃；
进样量：10 μl；
梯度：
表2.液相色谱梯度条件
时间/min | a/% | b/% |
0 | 15 | 85 |
48 | 26 | 74 |
48.1 | 35 | 65 |
58 | 35 | 65 |
65 | 15 | 85 |
结果与讨论
本实验采用venusil® xbp c18(l)色谱柱对草乌药材中乌头碱进行了测定，由表3及图1可知，流动相a使用乙腈︰四氢呋喃=25︰15(v/v)；流动相b为0.11 mol/l醋酸铵溶液，梯度洗脱时，乌头碱峰形、分离效果良好。
表3. 草乌药材供试品溶液测试结果
样品名称 | 峰序号 | 化合物名称 | 保留时间/min | 理论塔板数 | 拖尾因子 | 分离度 |
草乌药材供试品溶液 | 1 | 乌头碱 | 17.168 | 9661 | 2.18 | — |
2 | 未知杂质 | 18.676 | 18550 | 0.88 | 2.41 |
图1.草乌药材供试品溶液高效液相色谱图
图2.草乌药材供试品溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大)
结论
本实验按照客户提供的测试方法，采用venusil® xbp c18(l)色谱柱(5 μm，150 å，4.6 × 250 mm)分离草乌药材中的乌头碱。结果表明色谱柱对草乌药材供试品溶液中乌头碱与相邻杂质峰分离度为2.41>1.5，能够满足检测要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil® xbp c18(l) | 5 μm，100 å，4.6 × 250 mm | 1支 | vx952505-l |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫45°shore a；1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
微孔滤膜 | 单膜，13 mm，0.45 μm | 100个/包 | as021345-t |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |
甲醇 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4×4 l/箱 | ah230-4 |
乙腈 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4×4 l/箱 | ah015-4 |
异丙醇 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4×4 l/箱 | ah323-4 |
乙酸乙酯 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4×4 l/箱 | ah100-4 |
四氢呋喃 | 4 l/瓶，色谱纯 | 4×4 l/箱 | ah340-4 |
应用编号：ap10033