前言
抗坏血酸，是具有许多生物学功能的水溶性己糖衍生物，其分子中2位和3位碳原子的两个烯醇式羟基极易解离，释放出h ，而被氧化成去氢抗坏血酸。抗坏血酸和去氢抗坏血酸在人体内形成可逆的氧化还原系统，此系统在生物氧化、还原作用及细胞呼吸中起重要作用。
本实验使用venusil® hilic色谱柱采用高效液相色谱 (hplc) 法结合蒸发光散射检测器，建立了去氢抗坏血酸的分析方法，以期为去氢抗坏血酸的分析提供参考。
表1. 去氢抗坏血酸化学信息
样品名称 | 英文名 | 结构式 | 分子式 | 分子量 | cas号 |
去氢抗坏血酸 | dehydroascorbic acid |
| c6h6o6 | 174.11 | 490-83-5 |
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器；
试剂材料
实验用水为屈臣氏蒸馏水；乙腈、甲酸均为色谱纯试剂；
去氢抗坏血酸对照品：白色粉末，由某药业集团股份有限公司提供；
高效液相色谱柱：venusil® hilic；5 μm，100 å，4.6 × 250 mm。
色谱条件
色谱柱：venusil® hilic；5 μm，100 å，4.6 × 250 mm；
流动相：0.1 %甲酸︰乙腈=10︰90(v/v)；
流 速：1.0 ml/min；
柱 温：30℃；
进样量：20 µl；
检测器条件
检测器：elsd；
雾化室温度：85℃；
载气：超纯氮气；
载气流量：2.0 ln/min
样品制备
称取去氢抗坏血酸对照品5 mg，置10 ml样品瓶中，加入5 ml流动相超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，经0.45 µm滤膜过滤，取续滤液作为对照品储备溶液。分别量取对照品储备液适量，加流动相稀释制成每1.0 ml中含去氢抗坏血酸10 µg；20 µg；30 µg；40 µg；50 µg的溶液，作为对照溶液。
结果与讨论
本实验采用venusil® hilic色谱柱建立了去氢抗坏血酸的分析方法，由表2及下图可知，流动相为乙腈和0.1 %甲酸，等度洗脱时，对去氢抗坏血酸保留、峰形较好，可满足检测要求。
表2.去氢抗坏血酸对照品溶液分析结果
序号 | 浓度(ug/ml) | 保留时间/min | 峰面积 | 理论塔板数 | 拖尾因子 | 备注 |
1 | 10 | 6.715 | 61833 | 11466 | 1.31 | 图1 |
2 | 20 | 6.723 | 167243 | 10886 | 1.35 | 图2 |
3 | 30 | 6.732 | 279992 | 10449 | 1.34 | 图3 |
4 | 40 | 6.748 | 395935 | 10730 | 1.35 | 图4 |
5 | 50 | 6.748 | 500841 | 11466 | 1.31 | 图5 |
图1. venusil® hilic色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(10 µg/ml)
图2. venusil® hilic色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(20 µg/ml)
图3. venusil® hilic色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(30 µg/ml)
图4. venusil® hilic色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(40 µg/ml)
图5. venusil® hilic色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(50 µg/ml)
结论
本实验采用venusil® hilic色谱柱建立了去氢抗坏血酸的分析方法，根据实验结果可知，采用蒸发光散射检测器，流动相为乙腈和0.1 %甲酸，等度洗脱时，对去氢抗坏血酸保留、峰形较好，可满足检测要求。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
venusil® hilic | 5 μm，100 å，4.6 × 250 mm | 1支 | vh952505-0 |
1.5 ml样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 ml样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色ptfe隔垫 45°shore a；1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
微孔滤膜 | 单膜，13 mm，0.45 μm | 100个/包 | as021345-t |
一次性注射器 | 2 ml无针头 | 100支/包 | lzsq-2ml |